3M Listeria MDAL96 Manual Del Usuario página 52

4.5 Ripetere i punti da 4.1 a 4.4 fin quando è necessario, per il numero di campioni da testare.
4.6 Una volta trasferiti tutti i campioni, trasferire 20 µl di NC in un tubo di LS. Utilizzare lo Strumento di inserimento/rimozione del tappo per il
rilevamento molecolare 3M - Lisi per reinserire il tappo nel tubo di LS.
4.7 Proteggere la rastrelliera per i tubi LS con un coperchio e capovolgere 3-5 volte con decisione per miscelare. La sospensione deve fluire
liberamente all'interno del tubo.
5. Verificare che la temperatura dell'Inserto del blocco di calore per il sistema di rilevamento molecolare 3M sia 100 ± 1 °C. Posizionare la
rastrelliera per i tubi LS nell'Inserto del blocco di calore per il sistema di rilevamento molecolare 3M e riscaldare per 15 ± 1 minuti
non correttamente trattati termicamente durante la fase di lisi dell'analisi possono essere considerati un potenziale rischio biologico e NON
dovranno essere inseriti nello Strumento per l'analisi molecolare 3M.
6. Rimuovere la rastrelliera per i tubi LS dal blocco di calore e lasciare raffreddare nel Blocco di raffreddamento estraibile per il sistema
di rilevamento molecolare 3M per 10 ± 1 minuti
raffreddamento estraibile per il sistema di rilevamento molecolare 3M.
7. Rimuovere la rastrelliera per i tubi LS dal sistema Blocco di raffreddamento estraibile per il sistema di rilevamento molecolare 3M/Vassoio
per blocco di raffreddamento estraibile per il sistema di rilevamento molecolare 3M. Ricollocare il coperchio sulla rastrelliera per i tubi LS e
capovolgerla con decisione da 3 a 5 volte per miscelare. La sospensione deve fluire liberamente all'interno del tubo.
8. Picchiettare con decisione la rastrelliera per i tubi di lisi sul banco di laboratorio per 3-5 volte.
9. Posizionare la rastrelliera sul banco di laboratorio. Lasciare riposare per 5-10 minuti per consentire alla resina di stabilizzarsi. Non miscelare né
muovere la resina sul fondo del tubo.
99-101ºC
99-101 °C
(a) Un'alternativa per equilibrare i tubi LS a temperatura ambiente è l'incubazione in un incubatore a 37 ± 1 °C per 1 ora o a temperatura
ambiente per una notte (16-18 ore).
(b) Un'alternativa all'uso di calore secco per la fase di lisi è utilizzare una tecnica di bagnomaria a 100 ± 1 °C. Accertarsi di utilizzare una quantità
d'acqua sufficiente a coprire il livello di liquido nei tubi LS. Posizionare la rastrelliera per i tubi LS a bagnomaria a 100 ± 1 °C e riscaldarli per
15 ± 1 minuti.
(c) È possibile che la soluzione LS si congeli durante la lavorazione di meno di 48 tubi di LS. Il congelamento della soluzione LS non inficia il test.
Se si osserva un congelamento, far scongelare i tubi LS per 5 minuti prima della miscelazione.
AMPLIFICAZIONE
1. È necessario un tubo di reagente per ciascun campione e NC.
1.1 Le strisce di tubi di reagente possono essere tagliate al numero di tubi desiderato. Selezionare il numero necessario di singoli tubi di reagente
o di strisce da 8 tubi.
1.2 Posizionare i tubi di reagente in una rastrelliera vuota.
1.3 Evitare di spostare le pastiglie di reagente poste sul fondo dei tubi.
2. Selezionare 1 tubo di Controllo reagente (RC) e posizionarlo nella rastrelliera.
3. Al fine di evitare la contaminazione crociata, rimuovere i tappi da una striscia di tubi di reagente alla volta e utilizzare una nuova punta di pipetta
per ciascuna fase di trasferimento.
4. Trasferire il lisato nei tubi di reagente e nel tubo RC come descritto di seguito:
Trasferire prima ciascun lisato campione nei tubi di reagente singoli, quindi trasferire il NC. Idratare il tubo RC per ultimo.
AVVERTENZA: prestare attenzione durante il pipettaggio LS, poiché il trasferimento della resina può interferire con l'amplificazione.
4.1 Utilizzare lo Strumento di inserimento/rimozione del tappo per il rilevamento molecolare 3M™ - Reagente per rimuovere il tappo dai tubi di
reagente, una striscia di tubi di reagente alla volta. Gettare il tappo.
4.2 Trasferire 20 µl di lisato campione dalla parte superiore del fluido del tubo LS al tubo di reagente corrispondente. Erogare con un'inclinazione
per evitare il movimento delle pastiglie. Miscelare pipettando delicatamente su e giù per 5 volte.
4.3 Ripetere il punto 4.2 finché ciascun lisato campione singolo non è stato aggiunto a un tubo di reagente corrispondente nella striscia.
4.4 Coprire i tubi di reagente con i tappi supplementari forniti e utilizzare il lato arrotondato dello Strumento di inserimento/rimozione del tappo
per il rilevamento molecolare 3M - Reagente per applicare pressione con un movimento in avanti e all'indietro assicurandosi di stringere bene
il tappo.
4.5 Ripetere i punti da 4.1 a 4.4 fin quando è necessario, per il numero di campioni da testare.
. Rimuovere il coperchio della rastrelliera durante l'incubazione nel Blocco di
(c)
0-20ºC 20-25ºC
0-20 °C 20-25 °C
8
3X
20-25ºC
20-25 °C
3X
20-25 °C 20-25ºC
IT (italiano)
. I campioni
(b)