3M Listeria MDAL96 Manual Del Usuario página 41

4.5 Wiederholen Sie bei Bedarf die Schritte 4.1 bis 4.4 bei allen zu prüfenden Proben.
4.6 Geben Sie nach Überführung aller Proben 20 µl der NC in ein Lysegefäß hinein. Bringen Sie die Kappe des Lysegefäßes mit dem 3M
Molekulare Detektion – Cap/Decap-Werkzeug – Lyse wieder an.
4.7 Schließen Sie den Deckel des Lysegefäßträgers und stellen Sie ihn 3–5 Mal auf den Kopf, um den Inhalt zu vermischen. Die Suspension
muss frei im Gefäß fließen.
5. Stellen Sie fest, ob der 3M Molekulare Detektion – Heizblockeinsatz die erforderliche Temperatur von 100 ± 1 °C erreicht hat. Stellen Sie den
Lysegefäßträger in den 3M Molekulare Detektion – Heizblockeinsatz und erwärmen Sie ihn 15 ± 1 Minuten lang
während der Lyse nicht ordnungsgemäß wärmebehandelt worden sind, tragen möglicherweise ein biologisches Risiko und sollten NICHT in das
3M Molekulare Detektion – Gerät eingesetzt werden.
6. Nehmen Sie den Gefäßträger mit den Lysegefäßen aus dem Heizblock und lassen Sie ihn 10 ± 1 Minuten lang im 3M Molekulare Detektion
– Kühlblockeinsatz abkühlen
Gefäßträgers ab.
7. Nehmen Sie den Lysegefäßträger aus dem 3M Molekulare Detektion – Kühlblockeinsatz/3M Molekulare Detektion – Kühlblockträgersystem
heraus. Setzen Sie den Deckel wieder auf den Lysegefäßträger auf und stellen Sie den Träger 3–5 Mal auf den Kopf, um den Inhalt zu vermischen.
Die Suspension muss frei im Gefäß fließen.
8. Klopfen Sie den Lysegefäßträger 3–5 Mal fest auf die Laborbank.
9. Stellen Sie den Träger anschließend auf der Laborbank ab. Lassen Sie ihn 5–10 Minuten lang stehen, damit sich das Harz legen kann.
Vermischen oder verrühren Sie das Harz, das sich unten am Gefäß abgesetzt hat, nicht mit dem restlichen Gefäßinhalt.
99-101ºC
99-101 °C
(a) Alternativ können Sie die Lysegefäße auch durch Inkubieren in einem Inkubator bei 37 ± 1 °C für 1 Stunde oder über Nacht (16–18 Stunden)
bei Zimmertemperatur auf Zimmertemperatur bringen.
(b) Alternativ zur trockenen Hitze kann beim Lyseverfahren ein Wasserbad mit einer Temperatur von 100 ± 1 °C verwendet werden. Vergewissern
Sie sich dabei, so viel Wasser zu verwenden, dass die Höhe des Flüssigkeitsstandes in den Lysegefäßen erreicht wird. Setzen Sie den
Lysegefäßträger in das 100 ± 1 °C heiße Wasserbad und wärmen Sie die Gefäße 15 ± 1 Minuten lang auf.
(c) Werden weniger als 48 Lysegefäße verarbeitet, können Sie die restliche Lyselösung einfrieren. Ein Einfrieren der Lyselösung nimmt keinen
Einfluss auf das Testergebnis. Falls die Lyselösung gefroren ist, lassen Sie diese vor dem Vermischen 5 Minuten lang auftauen.
AMPLIFIKATION
1. Für jede Probe und die Negativkontrolle ist jeweils ein Reagenzgefäß erforderlich.
1.1 Die Reagenzgefäßstreifen können auf die gewünschte Anzahl an Gefäßen zurechtgeschnitten werden. Bestimmen Sie die Anzahl der
erforderlichen Reagenzgefäße oder 8-Gefäßstreifen.
1.2 Setzen Sie die Reagenzgefäße in einen leeren Gefäßträger.
1.3 Vermeiden Sie es, die Reagenzkügelchen im unteren Teil der Gefäße aufzurühren.
2. Wählen Sie 1 Reagenzienkontrollgefäß (RC) und stellen Sie es in den Gefäßträger.
3. Um eine Kreuzkontamination zu vermeiden, entkappen Sie jeweils nur einen Reagenzgefäßstreifen und verwenden Sie bei jeder Übertragung eine
neue Pipette.
4. Übertragen Sie das Lysat wie unten beschrieben auf die Reagenzgefäße und das RC-Gefäß:
Geben Sie zunächst jedes Probenlysat in ein separates Reagenzgefäß, und anschließend die NC. Hydrieren Sie zuletzt das RC-Gefäß.
WARNUNG: Gehen Sie beim Pipettieren von LS äußerst vorsichtig vor, da ein Übertrag von Harz die Amplifikation beeinträchtigen könnte.
4.1 Entkappen Sie die Reagenzgefäße eines jeden Reagenzgefäßstreifens mit dem 3M™ Molekulare Detektion – Cap/Decap-Werkzeug –
Reagenz — entkappen Sie dabei jeweils einen Reagenzgefäßstreifen auf einmal. Entsorgen Sie die Kappen.
4.2 Übertragen Sie 20 µl des Probenlysats aus dem oberen Teil der Flüssigkeit im Lysegefäß in das entsprechende Reagenzgefäß. Halten Sie das
Gefäß dabei in einem schrägen Winkel, um die Kügelchen nicht aufzurühren. Mischen Sie den Gefäßinhalt dann, indem Sie ihn 5 Mal auf- und
abpipettieren.
4.3 Wiederholen Sie Schritt 4.2, bis Sie jedes einzelne Probenlysat einem entsprechenden Reagenzgefäß im Streifen hinzugefügt haben.
4.4 Verschließen Sie die Reagenzgefäße mit der mitgelieferten zusätzlichen Kappe und üben Sie mit der abgerundeten Seite des 3M Molekulare
Detektion – Cap/Decap-Werkzeugs – Reagenz in einer Vorwärts- und Rückwärtsbewegung Druck aus, um sicherzustellen, dass die Kappe
fest sitzt.
. Nehmen Sie für die Inkubation auf dem 3M Molekulare Detektion – Kühlblockeinsatz den Deckel des
(c)
0-20ºC
0-20 °C
3X
3X
20-25ºC
20-25 °C
8
DE (Deutsch)
. Diejenigen Proben, die
(b)
20-25ºC
20-25 °C
20-25 °C 20-25ºC