3M Listeria MDAL96 Manual Del Usuario página 151

5. Upewnić się, że temperatura wkładki 3M bloku grzewczego do diagnostyki molekularnej wynosi 100 ± 1°C. Umieścić stojak probówek LS we wkładce 3M bloku grzewczego
do diagnostyki molekularnej i ogrzewać przez 15 ± 1 minut
biologiczne i NIE należy ich umieszczać w urządzeniu 3M do diagnostyki molekularnej.
6. Wyjąć stojak z probówkami LS z bloku grzewczego i zostawić do ostygnięcia we wkładce 3M bloku chłodzenia do diagnostyki molekularnej na 10 ± 1 minut
statywu podczas inkubacji we wkładce 3M bloku chłodzenia do diagnostyki molekularnej.
7. Wyjąć statyw z probówkami LS z wkładki 3M bloku chłodzenia do diagnostyki molekularnej/tacy 3M bloku chłodzenia do diagnostyki molekularnej. Z powrotem założyć pokrywę
na statyw z probówkami LS i silnie odwrócić 3–5 razy w celu wymieszania. Zawiesina musi swobodnie przepływać w probówce.
8. Silnie uderzyć 3–5 razy statywem z probówkami z lizatem o stół laboratoryjny.
9. Umieścić statyw na stole laboratoryjnym. Pozostawić na 5-10 minut, by żywica opadła na dno probówki. Osadu na dnie probówki nie należy mieszać ani wstrząsać.
99-101ºC
99-101 °C
(a) Probówki LS można ogrzać do temperatury pokojowej również przez ich inkubację w temperaturze 37 ± 1°C w cieplarce przez 1 godzinę lub w temperaturze pokojowej przez całą
noc (16–18 godzin).
(b) Na etapie lizy zamiast ogrzewania na sucho można wykorzystać łaźnię wodną o temp. 100 ± 1°C. Należy sprawdzić, czy woda sięga poziomu cieczy w probówkach LS. Statyw
z probówkami LS należy umieścić w łaźni wodnej w temp. 100 ± 1°C i ogrzewać przez 15 ± 1 minut.
(c) W przypadku obróbki liczby probówek LS mniejszej niż 48 roztwór LS może zamarznąć. Zamarznięcie roztworu LS nie wpływa na wynik testu. W przypadku zauważenia
zamarzania należy przed rozpoczęciem mieszania pozostawić probówki LS na 5 minut do rozmrożenia.
AMPLIFIKACJA
1. Dla każdej próbki i próbki kontroli ujemnej (KU) wymagana jest jedna probówka z reagentem.
1.1 Taśmy z probówkami reagentu można dociąć do żądanej liczby probówek. Należy dobrać liczbę pojedynczych probówek reagentu lub taśm złożonych z 8 probówek stosownie
do potrzeb.
1.2 Umieścić probówki reagentu w pustym statywie.
1.3 Nie wolno dopuścić do wstrząśnięcia granulek reagentu na dnie probówek.
2. Wybrać 1 probówkę kontroli reagentu (KR) i umieścić ją w statywie.
3. Aby uniknąć zanieczyszczeń krzyżowych, należy otwierać taśmy z probówkami reagentu pojedynczo i na każdym etapie przenoszenia stosować nową końcówkę pipety.
4. Przenieść lizat do probówek reagentu i probówki KR w sposób opisany poniżej:
Przenieść najpierw lizat każdej próbki do oddzielnych probówek reagentu, a następnie KU. Na końcu dodać wodę do probówki KR.
OSTRZEŻENIE: Należy zachować ostrożność podczas przenoszenia LS pipetą, gdyż przeniesienie osadu może zakłócić amplifikację.
4.1 Do zdejmowania korków probówek reagentu (po jednej taśmie na raz) należy wykorzystać narzędzie 3M™ do zakładania/zdejmowania korków probówek reagentu do
diagnostyki molekularnej. Wyrzucić korek.
4.2 Przenieść 20 µl lizatu próbki z górnej części cieczy w probówce LS do odpowiadającej probówki reagentu. Pipetować pod kątem, aby nie dopuścić do wstrząśnięcia granulek.
Delikatnie wymieszać, pobierając i wypuszczając roztwór pipetą 5 razy.
4.3 Powtarzać etap 4.2 do czasu dodania lizatu poszczególnych próbek do odpowiadających probówek reagentu w taśmie.
4.4 Zamknąć probówki reagentu dołączonym dodatkowym korkiem i przy pomocy zaokrąglonej strony narzędzia 3M do zakładania/zdejmowania korków probówek reagentu do
diagnostyki molekularnej docisnąć korek, ruszając nim w przód i w tył, by upewnić się, że jest szczelnie dociśnięty.
4.5 Należy powtórzyć czynności od 4.1 do 4.4 dla wszystkich testowanych próbek.
4.6 Po przeniesieniu lizatów wszystkich próbek powtarzać etapy 4.1 do 4.4, by przenieść 20 µl lizatu KU do probówki reagentu.
4.7 Przenieść 20 µl lizatu KN do probówki SR. Pipetować pod kątem, aby nie dopuścić do wstrząśnięcia granulek. Delikatnie wymieszać, pobierając i wypuszczając roztwór
pipetą 5 razy.
. Próbki, które nie przeszły odpowiedniej obróbki cieplnej na etapie lizy, można uznać za potencjalne zagrożenie
(b)
0-20ºC 20-25ºC
0-20 °C 20-25 °C
8
3X
20-25 °C 20-25ºC
3X
20-25 °C 20-25ºC
PL
(Polski)
. Zdjąć pokrywę
(c)