3M Listeria MDAL96 Manual Del Usuario página 129

4.5 Repita as etapas 4.1 a 4.4, conforme necessário, para o número de amostras a serem testadas.
4.6 Quando todas as amostras tiverem sido transferidas, transfira 20 µL de NC1 para um tubo LS. Utilize a 3M Ferramenta de Tampar/
Destampar para Detecção Molecular - Lise para tampar novamente o tubo LS.
4.7 Cubra a prateleira de tubos LS com a tampa de prateleira e vire com firmeza de 3 a 5 vezes para misturar. A suspensão precisa fluir
livremente dentro do tubo.
5. Verifique se a temperatura do 3M Bloco de Aquecimento para Detecção Molecular está a 100 ± 1°C. Coloque a prateleira de tubos LS no 3M
Bloco de Aquecimento para Detecção Molecular e aqueça por 15 ± 1 minutos
adequada durante a etapa lise do ensaio, podem ser consideradas um risco biológico potencial e NÃO devem ser envolvidas no 3M Equipamento
de Detecção Molecular.
6. Remova a prateleira de tubos LS do bloco de aquecimento e deixe esfriar no 3M Bloco de Resfriamento para Detecção Molecular por
. Remova a tampa da prateleira durante a incubação no 3M Bloco de Resfriamento para Detecção Molecular.
10 ± 1 minutos
(c)
7. Remova a prateleira dos tubos LS do 3M Bloco de Resfriamento para Detecção Molecular / sistema 3M Bandeja de Bloco de Resfriamento para
Detecção Molecular. Substitua a tampa da prateleira de tubos LS e vire com firmeza de 3 a 5 vezes para misturar. A suspensão precisa fluir
livremente dentro do tubo.
8. Bata com firmeza a prateleira de tubos lise na bancada do laboratório de 3 a 5 vezes.
9. Coloque a prateleira na bancada do laboratório. Deixe em repouso por 5 a 10 minutos para permitir que a resina assente. Não misture ou agite a
resina na parte inferior do tubo.
99-101ºC
(a) As alternativas para equilibrar os tubos LS em temperatura ambiente são para incubar os tubos LS em uma incubadora a 37 ± 1°C por 1 hora
ou a temperatura ambiente de um dia para o outro (16-18 horas).
(b) Uma alternativa à utilização do aquecimento seco para a etapa lise é utilizar banho-maria à 100 ± 1°C. Certifique-se de que haja água
suficiente para cobrir até o nível de líquido nos tubos LS. Coloque a prateleira de tubos LS no banho-maria a 100 ± 1°C e aqueça por
15 ± 1 minutos.
(c) A solução LS pode congelar ao processar menos do que 48 tubos LS. O congelamento da solução LS não afetará o seu teste. Caso seja
identificado o congelamento, permita que os tubos LS descongelem por 5 minutos antes de misturar.
AMPLIFICAÇÃO
1. É necessário um tubo de reagente para cada amostra e para o NC.
1.1 Podem ser cortadas tantas tiras para tubos de reagente quantas forem desejáveis, de acordo com o número de tubos. Selecione o número de
tubos de reagente individuais ou tiras de 8 tubos necessários.
1.2 Coloque os tubos de reagentes em uma prateleira vazia.
1.3 Evite agitar os granulados reagentes da parte inferior dos tubos.
2. Selecione 1 tubo de Controle de Reagentes (RC) e coloque na prateleira.
3. Para evitar contaminação, destampe uma tira de tubo de reagentes de cada vez e utilize um novo ponteiro de pipeta para cada etapa da
transferência.
4. Transfira o lisado aos tubos de reagentes e ao tubo RC, conforme descrito abaixo:
Primeiro, transfira cada lisado da amostra para dentro de tubos de reagentes individuais, seguido pelo NC. Por último, hidrate o tubo RC.
AVISO: Tenha cuidado ao pipetar o LS, uma vez que o excesso de resina pode interferir na amplificação.
4.1 Utilize a 3M™ Ferramenta de Tampar/Destampar para Detecção Molecular - Reagente para destampar os tubos de reagentes – uma tira de
tubos de reagente de cada vez. Descarte a tampa.
4.2 Transfira 20 µL do lisado da amostra da parte superior do fluido no tubo LS para o tubo de reagente correspondente. Distribua de forma
a evita a agitação dos granulados. Misture inserindo e retirando a pipeta de forma suave 5 vezes.
4.3 Repita a etapa 4.2 até que todos os lisados das amostras individuais tenham sido adicionados a um tubo de reagente correspondente na tira.
4.4 Cubra os tubos de reagente com as tampas adicionais fornecidas e utilize o lado arredondado da 3M Ferramenta de Tampar/Destampar para
Detecção Molecular - Reagente para apertar com um movimento de vai e vem, garantindo que a tampa fique bem justa.
4.5 Repita as etapas 4.1 a 4.4, conforme necessário, para o número de amostras a serem testadas.
4.6 Quando todos os lisados de amostra tiverem sido transferidos, repita as etapas 4.1 a 4.4 para transferir 20 µL de lisado NC para um tubo de
reagente.
0-20ºC 20-25ºC
8
PT
. Amostras que não foram tratadas com aquecimento de forma
(b)
3X
20-25ºC
3X
20-25ºC
(Português)