Illumina NextSeq 1000 Guia Del Usuario página 42

Guía del sistema de secuenciación NextSeq 1000 y 2000
Tipo de biblioteca
TruSeq DNA Nano 550
TruSeq Stranded mRNA
En el caso de otros tipos de biblioteca, se recomienda una concentración de carga inicial de 650 pM.
Optimice esta concentración en los experimentos subsiguientes para identificar una concentración de
carga que produzca, de manera uniforme, datos que cumplan con las especificaciones.
Para optimizar la concentración de carga, utilice el criterio de medición % Loading Concentration
(% de concentración de carga) en el archivo de resultados PrimaryAnalysisMetrics.csv que
está disponible una vez terminado el experimento. Si el porcentaje de concentración de carga es
inferior al 95 %, aumente la concentración en incrementos de 100 pM en los experimentos
posteriores.
Número de ciclos de una lectura
Para cada lectura, introducir un mínimo de 26 ciclos y un máximo de 151 ciclos ayudará a garantizar
unos datos de calidad. El número exacto de ciclos dependerá del experimento. NextSeq 1000/2000
Control Software requiere al menos 1 ciclo para la Lectura 1, pero muestra una advertencia si el número
de ciclos de la Lectura 1 es inferior a 26.
El número total de ciclos de la Lectura 1, el Índice 1, el Índice 2 y la Lectura 2 no puede ser superior al
número de ciclos admitido por el kit más 38 ciclos para los kits de 100 ciclos y 200 ciclos, y más 27 ciclos
para los kits de 300 ciclos de P3. NextSeq 1000/2000 Control Software mostrará una advertencia
cuando el Índice 1 y el Índice 2 tengan menos de 6 ciclos. La advertencia no se mostrará si el Índice 1 o
el Índice 2 tienen 0 ciclos.
En los números de ciclo mínimo y máximo se incluye un ciclo adicional. Añada siempre un ciclo a la
longitud de lectura deseada para corregir los efectos de hebra retrasada y hebra adelantada. La
longitud de lectura es el número de ciclos de secuenciación en la Lectura 1 y la Lectura 2, la cual excluye
los ciclos adicionales y los ciclos de índices. Para obtener más información, consulte Corrección de
hebra retrasada en Flujo de trabajo de análisis en tiempo real en
Ejemplo de configuración de experimento:
Para una longitud de lectura de 35 ciclos (lectura individual), introduzca 36 en el campo Read 1
•
(Lectura 1).
Para una longitud de lectura de 150 ciclos por lectura ("paired-end"), introduzca 151 en el campo
•
Read 1 (Lectura 1) y 151 en el campo Read 2 (Lectura 2).
N.º de documento 1000000109376 v05 ESP
Para uso exclusivo en investigación. Prohibido su uso en procedimientos de diagnóstico.
Concentración de carga (pM)
1500
1000
la página 65.
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