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NextSeq 1000 y 2000 Guía del sistema de secuenciación PROPIEDAD EXCLUSIVA DE ILLUMINA N.º de documento 1000000109376 v05 ESP Agosto de 2021 Para uso exclusivo en investigación. Prohibido su uso en procedimientos de diagnóstico.
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Este documento y su contenido son propiedad exclusiva de Illumina, Inc. y sus afiliados (“Illumina”) y están previstos solamente para el uso contractual de sus clientes en conexión con el uso de los productos descritos en él y no para ningún otro fin.
Historial de revisiones N.º de Fecha Descripción del cambio documento 1000000109376 Agosto Se ha añadido información del reactivo P1 de 2021 NextSeq 1000/2000. Se han actualizado los números de versión del software de control NextSeq 1000/2000 Control Software a v1.3 o posterior. Se han actualizado las instrucciones de instalación del software para incluir pasos adicionales.
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Guía del sistema de secuenciación NextSeq 1000 y 2000 N.º de Fecha Descripción del cambio documento 1000000109376 Abril de Instrucciones adicionales para importar archivos de 2021 referencia. Flujo de trabajo de amplicones de ADN DRAGEN adicional. Características adicionales para NextSeq 1000/2000 Control Software v1.3. Información adicional para seleccionar un servidor Proxy.
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Guía del sistema de secuenciación NextSeq 1000 y 2000 N.º de Fecha Descripción del cambio documento 1000000109376 Octubre Se ha añadido NextSeq 2000 P3 Reagents kit. Se ha añadido el flujo de trabajo DRAGEN Single Cell 2020 RNA. Se ha añadido el flujo de trabajo DRAGEN Enrichment. Se han añadido las opciones de compresión de FASTQ.
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1000000109376 Junio de Se han actualizado las descripciones del software de 2020 NextSeq 1000/2000 Control Software. Se ha aclarado la distinción entre los modos Cloud (Nube), Hybrid (Híbrido), Local y Standalone (Independiente) en la guía. Se han actualizado las instrucciones para almacenar y descongelar cartuchos.
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Guía del sistema de secuenciación NextSeq 1000 y 2000 N.º de Fecha Descripción del cambio documento Se han añadido instrucciones para volver a poner en cola un experimento. Se han añadido instrucciones para actualizar los procesos y la licencia de DRAGEN. Se han añadido instrucciones para personalizar el instrumento.
Guía del sistema de secuenciación NextSeq 1000 y 2000 Índice Descripción general del sistema Otros recursos Hardware del instrumento Software integrado Process Management (Gestión del proceso) Diagrama del protocolo de secuenciación Cómo funciona la secuenciación Configuración del sistema Requisitos de la cuenta de usuario Configuración de BaseSpace Sequence Hub y la asistencia de Proactive Especificación de la ubicación de la carpeta de resultados predeterminada Importación de genomas de referencia personalizados...
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Guía del sistema de secuenciación NextSeq 1000 y 2000 Mantenimiento Liberación de espacio en el disco duro Actualizaciones de software Actualizaciones de flujos de trabajo y licencias de DRAGEN Sustitución del filtro de aire Solución de problemas Resolución de mensajes de error Devolución de los consumibles a almacenamiento Cancelación de un experimento Volver a poner en cola un experimento...
El sistema de secuenciación NextSeq™ 1000 de Illumina y el sistema de secuenciación NextSeq™ 2000 de Illumina® le ofrecen un método selectivo de la secuenciación de nueva generación o NGS . Este sistema basado en aplicaciones incorpora la tecnología de secuenciación de Illumina en un instrumento de escritorio rentable que ofrece las siguientes funciones: Accesibilidad y fiabilidad: NextSeq 1000/2000 cuenta con análisis de DRAGEN local, así...
NextSeq 1000 y NextSeq 2000 del sitio web de Illumina proporcionan recursos adicionales del sistema. Estos recursos incluyen el software, la formación, los productos compatibles y la siguiente documentación. Revise siempre las páginas de asistencia para obtener las versiones más recientes.
Secuencias de adaptadores Ofrece listas de las secuencias de adaptadores para los kits de Illumina (n.º de documento de preparación de bibliotecas de Illumina. 1000000002694) Hardware del instrumento Los sistemas de secuenciación NextSeq 1000 y NextSeq 2000 se componen de un botón de encendido, un monitor, una barra de estado, un compartimento de consumibles y puertos USB.
Guía del sistema de secuenciación NextSeq 1000 y 2000 D. Botón de encendido: controla el encendido del instrumento e indica si el sistema está activado (se ilumina), desactivado (apagado) o desactivado con alimentación de CA (parpadea). E. Puerto USB 3.0: para conectar una unidad portátil para la transferencia de datos. F.
El paquete de software del sistema incluye aplicaciones integradas que realizan experimentos de secuenciación y análisis. • NextSeq 1000/2000 Control Software: controla el funcionamiento del instrumento y ofrece una interfaz para configurar el sistema, configurar un experimento de secuenciación y supervisar las estadísticas del experimento conforme avanza la secuenciación.
Información del sistema Seleccione el menú del software de control situado en la esquina superior izquierda para abrir la sección About (Acerca de). La sección About (Acerca de) contiene información de contacto de Illumina y la siguiente información del sistema: •...
Guía del sistema de secuenciación NextSeq 1000 y 2000 de lecturas PF) y Total Yield (Rendimiento total). Para eliminar experimentos y liberar espacio, consulte Liberación de espacio en el disco duro en la página 85. Para volver a poner en cola un análisis integrado en el instrumento, consulte Volver a poner en cola un experimento en la página 94.
Guía del sistema de secuenciación NextSeq 1000 y 2000 Si el experimento no está en curso, apague y encienda el instrumento y, a continuación, vuelva a • abrir la pantalla Process Management (Gestión del proceso). Consulte Ciclo de apagado y encendido del instrumento en la página 94.
Análisis secundario BaseSpace Sequence Hub es el entorno informático basado en la nube de Illumina para la supervisión de experimentos, el análisis de los datos, el almacenamiento y la colaboración. Alberga DRAGEN y las aplicaciones de BaseSpace Sequence Hub, que admiten los métodos de análisis comunes para la secuenciación.
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Guía del sistema de secuenciación NextSeq 1000 y 2000 cBCL se cargan automáticamente en BaseSpace Sequence Hub y este inicia el análisis secundario de DRAGEN. Para el modo Hybrid (Híbrido), el análisis secundario de DRAGEN se realiza integrado en el instrumento y los archivos de resultados se pueden almacenar en una carpeta seleccionada o en la nube.
(usuario) La cuenta de administrador solo se utiliza para aplicar actualizaciones del sistema, como la actualización de NextSeq 1000/2000 Control Software, o para que el equipo de TI la utilice para montar una unidad de red persistente. Lleve a cabo el resto de funciones, incluida la secuenciación, con la cuenta de usuario.
Seleccione Set password now (Establecer contraseña ahora) e introduzca una contraseña. Seleccione Add (Añadir). El nuevo usuario se ha añadido a la lista de usuarios. Para conceder acceso al usuario al software de control NextSeq 1000/2000, siga estos pasos. a. Abra el terminal. b. Introduzca lo siguiente: $ sudo usermod -a -G ilmnusers <nombre de usuario nuevo>...
Si conoce la contraseña desde el momento en que se capturó la última imagen del sistema operativo, restaure esa imagen guardada. Si no recuerda la contraseña, contacte con el servicio de asistencia técnica de Illumina. • Configuración de BaseSpace Sequence Hub y la...
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Guía del sistema de secuenciación NextSeq 1000 y 2000 Opción Descripción y requisitos Proactive Support Only* (Solo Envía datos de rendimiento del instrumento a Illumina asistencia de Proactive) para una solución más rápida de los errores. Necesita conexión a Internet. Proactive and Run Monitoring Envía archivos InterOp y de registro a BaseSpace...
Cree una nueva carpeta en un disco duro externo. Esta carpeta será la ubicación de la carpeta de resultados predeterminada. NextSeq 1000/2000 Control Software requiere al menos dos niveles de carpetas anidadas para reconocer la ubicación como un disco duro externo.
Network File System (NFS) son los únicos métodos compatibles para el montaje permanente de una unidad de red en NextSeq 1000/2000. Instrucciones de montaje de SMB/CIFS Si NextSeq 1000/2000 Control Software está abierto, seleccione Minimize Application (Minimizar aplicación). Inicie sesión en ilmnadmin.
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El <directorio de resultados> representa la ubicación de la carpeta de resultados predeterminada. NextSeq 1000/2000 Control Software requiere al menos dos niveles de carpetas anidadas para reconocer la ubicación como una unidad de red montada.
En la carpeta <nombre local>, cree una nueva <subcarpeta>. Esta subcarpeta es la ubicación de la carpeta de resultados predeterminada. NextSeq 1000/2000 Control Software requiere al menos dos niveles de carpetas anidadas para reconocer la ubicación como una unidad de red montada.
Seleccione el menú del software de control y, a continuación, seleccione DRAGEN. En la sección Genome (Genoma), seleccione View Installed Genomes (Ver genomas instalados) para ver una lista de todos los genomas personalizados de Illumina que están instalados actualmente. Cierre el modal.
(Ordenador). Haga doble clic en usr (usuario) y, a continuación, en local (local). Haga doble clic en illumina y, a continuación, en aux_files (archivos auxiliares). Arrastre el archivo de referencia de ruido hasta aux_files (archivos auxiliares). Importación de archivos de referencia a través del terminal Después de importar el archivo de referencia, puede configurar su experimento de secuenciación...
Guía del sistema de secuenciación NextSeq 1000 y 2000 Configure otros ajustes como proceda seleccionando lo siguiente: a. Proactive, and Run Monitoring (Proactive y supervisión del experimento) o Proactive, Run Monitoring and Storage (Proactive, Supervisión del experimento y Almacenamiento). b. Menú desplegable de Hosting Location (Ubicación de alojamiento). [Opcional] Escriba un Private Domain Name (Nombre de dominio privado).
• verificación Denature and Dilute On Board (Desnaturalización y dilución en el instrumento). Consulte la Guía de desnaturalización y dilución de bibliotecas con NextSeq 1000 y 2000 (n.º de documento 1000000139235) para obtener instrucciones sobre la desnaturalización y la dilución manual de bibliotecas.
Guía del sistema de secuenciación NextSeq 1000 y 2000 Configurar actualizaciones de software En el menú del software de control, seleccione Settings (Configuración). Seleccione si desea que el sistema compruebe automáticamente la existencia de actualizaciones de software: • Para que el sistema lo compruebe automáticamente, seleccione la casilla de verificación Autocheck for software updates (Comprobar automáticamente las actualizaciones de software).
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Guía del sistema de secuenciación NextSeq 1000 y 2000 Seleccione No, Take Me Back (No, deseo regresar) para volver a la pantalla Settings • (Configuración). Se ha guardado la nueva configuración del Proxy, pero esta no se aplicará hasta que haya reiniciado el sistema. N.º...
La secuenciación en NextSeq 1000/2000 requiere un kit de reactivos P1 de NextSeq 1000/2000 de Illumina de un solo uso, un kit de reactivos P2 de NextSeq 1000/2000 de Illumina de un solo uso o un kit de reactivos P3 de NextSeq 2000 de Illumina. El kit de reactivos P1 de NextSeq 1000/2000 de Illumina está...
Guía del sistema de secuenciación NextSeq 1000 y 2000 Ambos consumibles tienen identificadores para su seguimiento y para garantizar la compatibilidad. El cartucho y la celda de flujo utilizan RFID Celda de flujo La celda de flujo es una celda de flujo con un único carril en tramas. Un cartucho de plástico alberga la celda de flujo basada en vidrio.
Todos los cartuchos incluyen 38 ciclos adicionales, salvo el cartucho de 300 ciclos del kit de reactivos P3 de NextSeq 2000 de Illumina, que incluye 27 ciclos adicionales. Por ejemplo, el cartucho de 200 ciclos del kit de reactivos P2 de NextSeq 1000/2000 de Illumina proporciona reactivos suficientes para hasta 238 ciclos de secuenciación.
La fecha en que caduca el consumible. Para unos resultados óptimos, utilice el consumible antes de esta fecha. Indica el fabricante (Illumina). El uso previsto es Solo para uso en investigaciones. Indica el número de referencia para poder identificar el consumible.¹...
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índice (hasta 400 millones de lecturas (100 ciclos) únicas). Incluye el cartucho de reactivos de n.º de NextSeq 1000/2000, la celda de flujo P2 de catálogo 20046812 NextSeq 1000/2000 y RSB con Tween 20. (200 ciclos) Compatible con NextSeq 1000 y n.º de NextSeq 2000.
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Puntas de pipeta, 1000 µl Proveedor de Perforación del envase metálico del depósito laboratorio general de la biblioteca. [Opcional] Control PhiX Illumina, n.º de Realización de un experimento solo de PhiX catálogo FC-110- o una adición en un control PhiX. 3001 [Opcional] Papel Proveedor de Secado del cartucho tras un baño de agua.
Guía del sistema de secuenciación NextSeq 1000 y 2000 Equipo auxiliar Compre el siguiente equipo con fines de secuenciación. Elemento Proveedor Finalidad Congelador, entre –25 °C Proveedor de laboratorio Almacenamiento del cartucho. y –15 °C general Hielera Proveedor de laboratorio Reserva de las bibliotecas general hasta la secuenciación.
Tipo de biblioteca Concentración de carga (pM) AmpliSeq™ for Illumina Library PLUS Illumina DNA Prep Illumina DNA Prep with Enrichment 1000 Illumina Stranded Total RNA con Ribo-Zero Plus Illumina Stranded mRNA Prep Illumina DNA PCR-Free 1000 100 % PhiX TruSeq DNA Nano 350 1200 N.º...
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Guía del sistema de secuenciación NextSeq 1000 y 2000 Tipo de biblioteca Concentración de carga (pM) TruSeq DNA Nano 550 1500 TruSeq Stranded mRNA 1000 En el caso de otros tipos de biblioteca, se recomienda una concentración de carga inicial de 650 pM. Optimice esta concentración en los experimentos subsiguientes para identificar una concentración de carga que produzca, de manera uniforme, datos que cumplan con las especificaciones.
(Experimentos planificados) en la que se incluyen los experimentos disponibles para ser secuenciados en los sistemas de secuenciación NextSeq 1000 y NextSeq 2000. Si está configurando un experimento en modo Local, utilice Instrument Run Setup (Configuración del experimento en el instrumento) para crear y exportar su hoja de muestras en formato de archivo v2.
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Guía del sistema de secuenciación NextSeq 1000 y 2000 Para el análisis integrado en el instrumento, la versión seleccionada debe coincidir con la versión de DRAGEN instalada en el instrumento. Para confirmar la versión de DRAGEN instalada en el instrumento, consulte Actualizaciones de flujos de trabajo y licencias de DRAGEN en la página 88.
DRAGEN, consulte Archivos de resultados del análisis secundario de DRAGEN en la página 70 Illumina DRAGEN BCL Convert Utilice los siguientes pasos para configurar el análisis Illumina DRAGEN BCL Convert. Introduzca los siguientes ajustes opcionales. Ajuste Descripción AdapterRead1 Secuencia del adaptador para la Lectura 1.
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Local. Esta opción solo está disponible si la ubicación del análisis seleccionada es Local. Illumina DRAGEN Enrichment Utilice los siguientes pasos para configurar el análisis Illumina DRAGEN Enrichment. Seleccione un genoma de referencia. Si es posible, utilice un genoma de referencia con ALT-Aware.
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Local. Esta opción solo está disponible si la ubicación del análisis seleccionada es Local. Illumina DRAGEN Germline Utilice los siguientes pasos para configurar el análisis Illumina DRAGEN Germline. Seleccione su genoma de referencia. Si es posible, utilice un genoma de referencia con ALT-Aware.
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Local. Esta opción solo está disponible si la ubicación del análisis seleccionada es Local. Illumina DRAGEN RNA Utilice los siguientes pasos para configurar el análisis Illumina DRAGEN RNA. Seleccione su genoma de referencia. Si es posible, utilice un genoma de referencia sin ALT-Aware.
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Local. Esta opción solo está disponible si la ubicación del análisis seleccionada es Local. Illumina DRAGEN Single Cell RNA Utilice los siguientes pasos para configurar el análisis Illumina DRAGEN Single Cell RNA. Seleccione su genoma de referencia. Si es posible, utilice un genoma de referencia sin ALT-Aware.
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Local. Esta opción solo está disponible si la ubicación del análisis seleccionada es Local. Illumina DRAGEN Amplicon Utilice los siguientes pasos para configurar el análisis Illumina DRAGEN Amplicon. Seleccione su genoma de referencia. Seleccione un archivo *.bed que contenga las regiones a las que le gustaría dirigirse o cargue un nuevo archivo personalizado.
Guía del sistema de secuenciación NextSeq 1000 y 2000 Modo Cloud (Nube) o Hybrid (Híbrido): seleccione Upload Custom File (BaseSpace) (Cargar • archivo personalizado [BaseSpace]). El archivo BED personalizado solo está disponible en el grupo de trabajo en el que se ha cargado. Modo Local: seleccione Select Custom File (Local) (Seleccionar archivo personalizado •...
Guía del sistema de secuenciación NextSeq 1000 y 2000 Figura 4 Cartucho en la bolsa Descongelación del cartucho en un baño de agua controlado Póngase un par de guantes sin talco nuevos y saque el cartucho de donde esté almacenado. Saque el cartucho de la caja, pero no abra la bolsa de aluminio plateada . Si se descongela una bolsa rota o perforada en un baño de agua, se puede producir un error de secuenciación.
Guía del sistema de secuenciación NextSeq 1000 y 2000 Descongelación del cartucho en un refrigerador Utilice un nuevo par de guantes sin talco. Un día antes del experimento previsto, extraiga el cartucho almacenado a una temperatura entre –25 °C y –15 °C. Saque el cartucho de la caja, pero no abra la bolsa de aluminio plateada . Coloque el cartucho a temperatura ambiente de forma que la etiqueta quede hacia arriba y el aire pueda circular por los lados y la parte superior.
Combine los volúmenes siguientes en un microtubo de baja unión para preparar 24 µl de biblioteca diluida con la concentración de carga correspondiente: PhiX es una biblioteca de Illumina pequeña y lista para usar con una representación equilibrada de nucleótidos. N.º de documento 1000000109376 v05 ESP...
650 pM y optimícela en experimentos posteriores. En esta tabla, se proporcionan ejemplos de concentraciones de carga. El sistema NextSeq 1000/2000 es compatible con todos los kits de preparación de bibliotecas de Illumina, pero la concentración de carga óptima puede variar.
Guía del sistema de secuenciación NextSeq 1000 y 2000 Agite en vórtice brevemente y, a continuación, centrifugue a 280 × g durante un minuto. Añada 1 µl de PhiX a 1 nM a 24 µl de biblioteca diluida con la concentración de carga final. Estos volúmenes producen un volumen adicional de PhiX de aproximadamente el 2 %. El porcentaje real varía en función de la calidad y la cantidad de la biblioteca.
Guía del sistema de secuenciación NextSeq 1000 y 2000 Tire de la celda de flujo para extraerla del envase. Aparte el envase metálico y el desecante por si tiene que volver a almacenar la celda de flujo. El desecante se encuentra en una bolsa en la parte inferior del envase metálico. Deséchelos cuando comience la secuenciación.
Modo Local: una hoja de muestras con el formato de archivo v2 se importa manualmente en NextSeq 1000/2000 Control Software. Tras finalizar la secuenciación, el análisis integrado en el instrumento se inicia automáticamente. Los datos cBCL y los archivos de resultados del análisis secundario de DRAGEN se almacenan en la carpeta de resultados seleccionada.
(Secuenciación mediante ciclo de oscuridad) En el caso de usar NextSeq 1000/2000 Control Software v1.3 o posterior, y el kit Illumina Stranded Total RNA Prep con Ribo-Zero Plus o el kit Illumina Stranded mRNA Prep, la fórmula personalizada se selecciona automáticamente.
Guía del sistema de secuenciación NextSeq 1000 y 2000 [Opcional] Para desnaturalizar y diluir manualmente las bibliotecas, deshaga la selección de la casilla de verificación Denature and Dilute On Board (Desnaturalización y dilución en el instrumento). Consulte la Guía de desnaturalización y dilución de bibliotecas con NextSeq 1000 y 2000 (n.º de documento 1000000139235).
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(Secuenciación mediante ciclo de oscuridad) En el caso de usar NextSeq 1000/2000 Control Software v1.3 o posterior, y el kit Illumina Stranded Total RNA Prep con Ribo-Zero Plus o el kit Illumina Stranded mRNA Prep, la fórmula personalizada se selecciona automáticamente.
Guía del sistema de secuenciación NextSeq 1000 y 2000 El campo Output Folder (Carpeta de resultados) se rellena automáticamente a partir de la configuración predeterminada y es obligatorio a menos que esté seleccionado Proactive, Run Monitoring and Storage (Proactivo, Supervisión del experimento y Almacenamiento). Si ha seleccionado Proactive, Run Monitoring and Storage (Proactivo, Supervisión del experimento y Almacenamiento), Save to BaseSpace Sequence Hub (Guardar en BaseSpace Sequence Hub) aparecerá...
Guía de cebadores personalizados de NextSeq 1000 y 2000 (n.º de documento 1000000139569). Asegúrese de visitar la página de Productos compatibles para su kit de preparación de bibliotecas para comprobar si es necesario utilizar los cebadores personalizados de Illumina. [Opcional] Seleccione una fórmula personalizada. Para obtener más información, consulte Secuenciación mediante ciclo de oscuridad en la página 114...
(con la pestaña gris quitada) y de la biblioteca diluida. Seleccione Load (Cargar). NextSeq 1000/2000 Control Software abre el visor y expulsa la bandeja. Coloque el cartucho en la bandeja con la etiqueta orientada hacia arriba y la celda de flujo dentro del instrumento.
Guía del sistema de secuenciación NextSeq 1000 y 2000 Supervisión del progreso del experimento Supervise el progreso del experimento y las mediciones conforme aparecen en la pantalla Sequencing (Secuenciación). Estimated run completion (Finalización de experimento estimada): la fecha y la hora •...
Guía del sistema de secuenciación NextSeq 1000 y 2000 [Opcional] Retire el tapón de purga situado debajo del logotipo de Illumina en el lateral del cartucho; realice esta operación en un lugar adecuado (por ejemplo, un fregadero o un recipiente para residuos líquidos peligrosos) manteniendo el tapón de purga horizontal y mirando hacia abajo,...
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Guía del sistema de secuenciación NextSeq 1000 y 2000 A. Bandeja de la celda de flujo B. Carcasa de la celda de flujo C. Perforador D. Conjunto de válvulas E. Cubierta de la válvula del rotor F. Carcasa inferior G. Placa de reactivos con pocillos H.
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Guía del sistema de secuenciación NextSeq 1000 y 2000 Alinee el cartucho con las dos patillas traseras. Alinee la herramienta de perforación con la etiqueta de la parte superior del cartucho. Presione hacia abajo con fuerza y rapidez la herramienta de perforación para separar la carcasa del cartucho.
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Guía del sistema de secuenciación NextSeq 1000 y 2000 Retire el perforador del cartucho. Retire la cubierta del conjunto de válvulas del rotor de avance. N.º de documento 1000000109376 v05 ESP Para uso exclusivo en investigación. Prohibido su uso en procedimientos de diagnóstico.
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Guía del sistema de secuenciación NextSeq 1000 y 2000 Siga uno de estos procedimientos para retirar la carcasa de la celda de flujo: • Inserte un destornillador de cabeza plana entre la carcasa de la celda de flujo y conjunto inferior, y luego levántelo. •...
Guía del sistema de secuenciación NextSeq 1000 y 2000 Retire el conjunto de válvulas tirando del lado inferior del conjunto. Deseche la placa de reactivos con pocillos, que puede contener reactivos sin usar, de conformidad con las normativas aplicables de su región. Limpie la bandeja del cartucho Solo es necesario limpiar la bandeja del cartucho si el reactivo se ha derramado sobre dicha bandeja del cartucho.
Descripción general de Análisis en tiempo real Los sistemas de secuenciación NextSeq 1000 y NextSeq 2000 utilizan RTA3, una implementación del software de análisis en tiempo real, en el motor informático del instrumento. RTA3 extrae las intensidades de las imágenes recibidas de la cámara, lleva a cabo una llamada de bases, asigna una...
Guía del sistema de secuenciación NextSeq 1000 y 2000 Los archivos de resultados se utilizan para los análisis sucesivos en DRAGEN y BaseSpace Sequence Hub. Gestión de errores RTA3 crea archivos de registro y los guarda en la carpeta de registros. Los errores se registran en un archivo de texto con formato *.log.
Guía del sistema de secuenciación NextSeq 1000 y 2000 Celda de Celda de Celda Componente flujo flujo de flujo de la celda de P1 de P2 de P3 de Descripción flujo NextSeq NextSeq NextSeq 1000/2000 1000/2000 2000 Total de Carriles × superficies × sectores × placas por placas cada sector equivale al número total de placas.
Guía del sistema de secuenciación NextSeq 1000 y 2000 ubicación de grupos (s.locs) para cada experimento. Si se produce un error en el registro de cualquier imagen en un ciclo, no se generará ninguna llamada de bases para esa placa en ese ciclo. Utilice el Visor del análisis de secuenciación para identificar qué imágenes no se han podido registrar.
Guía del sistema de secuenciación NextSeq 1000 y 2000 Las intensidades de cada grupo se extraen de la imagen verde y de la azul y se comparan una con otra, lo que produce cuatro poblaciones diferenciadas. Cada población se corresponde con una base. El proceso de llamada de bases determina a qué...
Guía del sistema de secuenciación NextSeq 1000 y 2000 En el caso del análisis de dos canales, RTA3 utiliza un sistema basado en la población para determinar la castidad (medición de pureza de la intensidad) de una llamada de bases. Los grupos que superan el filtro (PF) cuando solo una llamada de bases de los primeros 25 ciclos tiene un valor de castidad inferior al umbral fijado.
Guía del sistema de secuenciación NextSeq 1000 y 2000 media (aprox. Q20) y alta (> Q30) y se les asignan puntuaciones específicas de 12, 23 y 37, respectivamente. Además, se asigna una puntuación nula de 2 en caso de ausencia de llamadas. El modelo de elaboración de informes de puntuaciones de calidad (puntuaciones Q) reduce los requisitos de espacio de almacenamiento y ancho de banda sin detrimento de la precisión o el rendimiento.
Guía del sistema de secuenciación NextSeq 1000 y 2000 Tipo de archivo Descripción, ubicación y nombre del archivo Archivos de filtro El archivo de filtro especifica si los grupos han superado los filtros. Estos archivos se generan en el ciclo 26 mediante el uso de 25 ciclos de datos. Para cada placa, se genera un archivo de filtro.
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Guía del sistema de secuenciación NextSeq 1000 y 2000 En el caso de los procesos Germline, RNA, Enrichment y de amplicones de ADN que se ejecuten en • el análisis integrado en el instrumento, los archivos BAM no se cargarán en BaseSpace Sequence Hub si se selecciona Proactive, Run Monitoring and Storage (Proactivo, Supervisión del experimento y Almacenamiento).
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Guía del sistema de secuenciación NextSeq 1000 y 2000 Llamadas de variantes estructurales para lecturas paired-end • Llamadas de variantes de números de copias para genomas humanos • • Expansiones repetidas para genomas humanos • Regiones de homocigosis para genomas humanos •...
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Guía del sistema de secuenciación NextSeq 1000 y 2000 Componente Tipo Nombre del archivo de resultados Asignación o alineación BAM o • <nombre_muestra>.bam o • <nombre_muestra>.cram CRAM Llamadas de variantes VCF y • <nombre_muestra>.hard-filtered.gvcf.gz • <nombre_muestra>.hard-filtered.vcf.gz pequeñas gVCF* * Los archivos de salida *.gVCF solo están disponibles para el modo germinal. Proceso DRAGEN RNA El proceso DRAGEN RNA admite las siguientes funciones •...
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Guía del sistema de secuenciación NextSeq 1000 y 2000 Nombre del archivo de Componente Tipo Descripción resultados Cuantificación de Texto sin • nombre_ • Resultados de transcripción formato muestra.quant.genes.sf cuantificación de transcripción a nivel de los genes. • nombre_ muestra.quant.sf • Todos los resultados de cuantificación de transcripción.
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Guía del sistema de secuenciación NextSeq 1000 y 2000 Nombre de archivo Descripción Control_vs_ Contiene la variación de las relaciones de expresión Comparison.genes.ma.png genética como una función de la intensidad de señal promedio. Para mostrar las diferencias entre las mediciones tomadas en dos muestras, el gráfico transforma los datos en M (relación logarítmica) y A (promedio) La gráfica MA muestra las modulaciones log2 atribuibles a una variable dada sobre la media de...
Guía del sistema de secuenciación NextSeq 1000 y 2000 Componente Tipo Nombre del archivo de resultados Asignación o alineación BAM o • <nombre_muestra>.bam o • <nombre_muestra>.cram CRAM Clasificación de células o TSV, CSV y • <nombre_de_ genes muestra>.scRNA.barcodeSummary.tsv • <nombre_de_muestra>.scRNA.genes.tsv • <nombre_de_muestra>.scRNA.matrix.mtx Informes del análisis HTML...
Guía del sistema de secuenciación NextSeq 1000 y 2000 Criterio de medición Descripción SampleID El ID de la muestra de la hoja de muestras. Si una lectura no se corresponde con una muestra, el campo muestra undetermined (sin determinar). Index La concatenación de la lectura del índice 1 y de la lectura del índice 2 de la hoja de muestras se separan mediante un guion.
Guía del sistema de secuenciación NextSeq 1000 y 2000 Criterio de Descripción medición El número de bases correspondiente a AdapterRead1 en la hoja de muestras. AdapterBases Número de bases recortadas o enmascaradas de la Lectura 1 para el carril y la SampleBases muestra correspondientes.
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# Reads El número de lecturas de la muestra del carril especificado. Informes de control de calidad de DRAGEN de Illumina DRAGEN FastQC genera gráficos de control de calidad (CC) de forma predeterminada para todos los procesos. El conjunto de resultados de CC se guardan en la carpeta AggregatedFastqcMetrics y los resultados por muestra se guardan en la carpeta <nombre_de_muestra>.
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Guía del sistema de secuenciación NextSeq 1000 y 2000 Gráfico de CC Descripción positional_quality.read_2 Valor promedio de calidad en la escala Phred de bases con un nucleótido específico y en una ubicación determinada en la Lectura 2. n_content read_length Longitud de la secuencia para cada lectura. positional_base_content.read_1 Número de bases de cada nucleótido específico en ubicaciones determinadas en la Lectura 1.
Guía del sistema de secuenciación NextSeq 1000 y 2000 Estructura de carpetas de resultados de análisis secundario de DRAGEN DRAGEN genera de forma predeterminada los archivos de resultados en la carpeta de resultados seleccionada en la pestaña Settings (Configuración). Para cada flujo de trabajo, DRAGEN elabora un informe a modo de resumen en el archivo report.html.
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Guía del sistema de secuenciación NextSeq 1000 y 2000 logs (registros) *.txt *.csv fastq: solo disponible si KeepFastq se ha establecido como true (verdadero). *.fastq.gz ora_fastq: solo disponible si FastqCompressionFormat se ha establecido como dragen. *.fastq.ora RunInstrumentAnalyticsMetrics (EjecutarMedicionesAnalíticasDelInstrumento) 0001 dataset.json (conjuntodedatos.json) fastqc_metrics.csv (mediciones_fastqc.csv) 0002 dataset.json (conjuntodedatos.json)
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Guía del sistema de secuenciación NextSeq 1000 y 2000 Adapter_Metrics.csv (Mediciones_Adaptador.csv) Demultiplex_Stats.csv (Estadísticas_Demultiplex.csv) Index_Hopping_Counts.csv (Recuentos_Intercambio_Indices.csv) Read1Metrics (MedicionesLectura1): solo para lecturas "paired-end". Adapter_Metrics.csv (Mediciones_Adaptador.csv) Index_Hopping_Counts.csv (Recuentos_Intercambio_Indices.csv) N.º de documento 1000000109376 v05 ESP Para uso exclusivo en investigación. Prohibido su uso en procedimientos de diagnóstico.
Elimine únicamente los experimentos con NextSeq 1000/2000 Control Software en lugar de hacerlo manualmente a través del sistema operativo. Si elimina experimentos manualmente, esto puede afectar negativamente al software de control.
Guía del sistema de secuenciación NextSeq 1000 y 2000 Actualizaciones de software La actualización del software garantiza que su sistema disponga de las funciones y correcciones más recientes. Las actualizaciones de software se integran en un paquete de sistemas, que incluye el siguiente software: Software de control de NextSeq 1000/2000 •...
Guía del sistema de secuenciación NextSeq 1000 y 2000 Si se muestra un mensaje de instalación de firmware después de que se reinicie el software, continúe con la actualización. El instrumento muestra la pantalla en negro durante las actualizaciones de firmware. Una vez terminada la actualización, se muestra un mensaje de finalización.
Si el NextSeq 1000/2000 está conectado a Internet, actualice la licencia de la plataforma de tecnología bioinformática DRAGEN Bio-IT de la siguiente manera. Póngase en contacto con el servicio de asistencia técnica de Illumina para obtener una nueva clave de licencia.
Guía del sistema de secuenciación NextSeq 1000 y 2000 Seleccione el menú del software de control y, a continuación, seleccione DRAGEN. En esta versión, la sección Available Workflows (Flujos de trabajo disponible) enumera los flujos de trabajo instalados actualmente en el sistema. Para instalar los flujos de trabajo de DRAGEN en el software de control de NextSeq 1000/2000, seleccione Check Online (Comprobación en línea).
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Los repuestos adicionales se incluyen con un contrato de servicio del instrumento válido o se pueden adquirir por separado en Illumina. En la parte superior del instrumento, presione sobre el lado derecho del panel superior para desacoplarlo como se muestra en la siguiente ilustración.
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Guía del sistema de secuenciación NextSeq 1000 y 2000 Cierre el panel superior y presione para fijarlo en su sitio. Vuelva a colocar el instrumento en la posición original. N.º de documento 1000000109376 v05 ESP Para uso exclusivo en investigación. Prohibido su uso en procedimientos de diagnóstico.
Guía del sistema de secuenciación NextSeq 1000 y 2000 Solución de problemas En esta sección, se ofrecen instrucciones paso a paso para cancelar un experimento, apagar y encender el instrumento, además de otros procedimientos de solución de problemas. Resolución de mensajes de error En este apéndice, se proporcionan instrucciones detalladas para varios pasos de solución de problemas.
Guía del sistema de secuenciación NextSeq 1000 y 2000 Devolución de los consumibles a almacenamiento Siga estas instrucciones para almacenar un cartucho y una celda de flujo descongelados en el caso de que se produzca un error en el instrumento durante la comprobación previa al experimento, antes de la comprobación de la fluídica.
Guía del sistema de secuenciación NextSeq 1000 y 2000 Seleccione Close Door (Cerrar puerta) para volver a cargar la bandeja y volver a la pantalla Home (Inicio). Los sensores confirmarán la retirada del cartucho. Volver a poner en cola un experimento Si se muestra un error del estado del análisis secundario en Process Management (Gestión del proceso), puede volver a poner en cola el experimento para volver a realizar un análisis integrado en el instrumento de DRAGEN en los archivos cBCL generados.
No se precisa ejecutar ninguna comprobación del sistema para el funcionamiento normal o el mantenimiento del instrumento. No obstante, un representante del servicio de asistencia técnica de Illumina puede solicitarle que ejecute una comprobación del sistema para solucionar posibles problemas.
Guía del sistema de secuenciación NextSeq 1000 y 2000 Los resultados se generan en la carpeta system-check ubicada en /usr/local/illumina/system- check. Asegúrese de descargar el cartucho antes de llevar a cabo las verificaciones del sistema. Ejecución de una comprobación del sistema En el menú...
Las opciones del sistema operativo aparecen brevemente antes de continuar automáticamente con NextSeq 1000/2000 Control Software. Las contraseñas están ligadas a la imagen del sistema. Tras la restauración, utilice la contraseña de la imagen restaurada para iniciar sesión en el sistema.
Guía del sistema de secuenciación NextSeq 1000 y 2000 Recursos y referencias Configuración de la hoja de muestras v2 Si utiliza el modo Local, puede utilizar el formato de archivo de las hojas de muestras v2 para configurar los ajustes de su experimento. Cree la hoja de muestras en Instrument Run Setup (Configuración del experimento en el instrumento) o editando la plantilla de la hoja de muestras v2 de los sistemas de secuenciación NextSeq 1000 y NextSeq 2000.
Guía del sistema de secuenciación NextSeq 1000 y 2000 Campo Necesario Descripción FileFormatVersion Sí La versión de la hoja de muestras. Introduzca 2 como valor. RunName El nombre de experimento único que desee. RunName puede contener caracteres alfanuméricos, guiones bajos, guiones y puntos.
[BCLConvert_Settings] y [BCLConvert_Data]. Las secciones BCL Convert (Conversión de BCL) requieren información sobre las secuencias del adaptador de índices. Para identificar la secuencia del adaptador compatible para cada lectura e índice, consulte Secuencias de adaptadores de Illumina (n.º de documento 1000000002694).
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Guía del sistema de secuenciación NextSeq 1000 y 2000 Campo Necesario Descripción BarcodeMismatchesIndex2 El número de incoherencias permitidas entre la segunda lectura del índice y la secuencia de índice. Los valores pueden ser 0, 1 o 2. El valor predeterminado es FastqCompressionFormat Para generar archivos FASTQ en formato *.gz, introduzca gzip.
Guía del sistema de secuenciación NextSeq 1000 y 2000 Campo Necesario Descripción Sample_ID Sí ID de la muestra. El ID de muestra puede contener un máximo de 20 caracteres alfanuméricos, guiones y guiones bajos. El ID distingue entre mayúsculas y minúsculas. Separe cada identificador con un guion o un guion bajo.
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/usr/local/illumina/genomes. Para utilizar un genoma de referencia personalizado, consulte la Ayuda en línea de la aplicación Reference Builder para Illumina Instruments v1.0.0. MapAlignOutFormat El formato del archivo de resultados. Los valores permitidos son bam o cram. Si no se especifica ningún valor, no hay ningún valor...
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/usr/local/illumina/genomes. Para utilizar un genoma de referencia personalizado, consulte la Ayuda en línea de la aplicación Reference Builder para Illumina Instruments v1.0.0. RnaGeneAnnotationFile El archivo que contiene anotaciones genéticas de ARN. Solo se permiten caracteres alfanuméricos.
Los genomas de referencia se encuentran en /usr/local/illumina/genomes. Para utilizar un genoma de referencia personalizado, consulte la Ayuda en línea de la aplicación Reference Builder para Illumina Instruments v1.0.0. BedFile Sí El archivo *.bed que contiene las regiones a las que se dirigirá.
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Guía del sistema de secuenciación NextSeq 1000 y 2000 Campo Necesario Descripción GermlineOrSomatic Sí Para realizar un análisis de enriquecimiento germinal, escriba germline. Para realizar un análisis de enriquecimiento somático, escriba somatic. KeepFastq Para guardar archivos de resultados FASTQ, escriba true (verdadero). Para eliminar archivos de resultados FASTQ, escriba false (falso).
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Los genomas de referencia se encuentran en /usr/local/illumina/genomes. Para utilizar un genoma de referencia personalizado, consulte la Ayuda en línea de la aplicación Reference Builder para Illumina Instruments v1.0.0. DnaBedFile Sí El archivo *.bed que contiene las regiones a las que se dirigirá.
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Guía del sistema de secuenciación NextSeq 1000 y 2000 Campo Necesario Descripción Sample_ID Sí ID de la muestra. El ID de muestra puede contener un máximo de 20 caracteres alfanuméricos. El ID distingue entre mayúsculas y minúsculas. Separe cada identificador con un guion.
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Los genomas de referencia se encuentran en /usr/local/illumina/genomes. Para utilizar un genoma de referencia personalizado, consulte la Ayuda en línea de la aplicación Reference Builder para Illumina Instruments v1.0.0. RnaLibraryType Introduzca uno de los valores siguientes: • SF: Stranded forward (cadena directa). SF es el valor predeterminado.
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Guía del sistema de secuenciación NextSeq 1000 y 2000 Campo Necesario Descripción BarcodePosition Sí La ubicación de las bases que corresponden al código de barras en el valor introducido para BarcodeRead. Las posiciones de las bases se indexan empezando por la posición cero. Introduzca el valor BarcodePosition en el siguiente formato: 0_<posición final del código de...
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Los genomas de referencia se encuentran en /usr/local/illumina/genomes. Para utilizar un genoma de referencia personalizado, consulte la Ayuda en línea de la aplicación Reference Builder para Illumina Instruments v1.0.0. RnaLibraryType Introduzca uno de los valores siguientes: • SF: Stranded forward (cadena directa).
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Guía del sistema de secuenciación NextSeq 1000 y 2000 Campo Necesario Descripción RnaGeneAnnotationFile El archivo que contiene anotaciones genéticas de ARN. Solo se permiten caracteres alfanuméricos. Si no se suministra, se utiliza el archivo de anotaciones predeterminado incluido en el genoma de referencia especificado. BarcodeRead La ubicación dentro del experimento de secuenciación del código de barras leído, que...
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Guía del sistema de secuenciación NextSeq 1000 y 2000 Campo Necesario Descripción UmiPosition Sí La ubicación de las bases que corresponden al UMI en el BarCodeRead especificado. Introduzca la secuencia de caracteres en el siguiente formato: <Posición de inicio de UMI>_<posición final de UMI>...
La secuenciación mediante ciclo de oscuridad se utiliza tan solo para completar los pasos del proceso químico de un ciclo de secuenciación. Consulte la página Compatible Products (Productos compatibles) para su kit de preparación de bibliotecas en el sitio de asistencia de Illumina para saber si se requiere la secuenciación mediante ciclo de oscuridad.
Guía del sistema de secuenciación NextSeq 1000 y 2000 <SetThermalZoneTemp Enable="false" Zone="FlowCellHeater" /> </Protocol> <Protocol Name="1 Read 1 Index" ProtocolType="1Read1Index" > <ChemistryRef ChemistryName="Start" /> <ChemistryRef ChemistryName="2min 60C Vacuum Hold" /> Adición de la fórmula al experimento En Run Setup (Configuración del experimento) en el software de control, seleccione Choose (Elegir) en Custom Recipe (Fórmula personalizada).
3 nombre del instrumento 22 comprobaciones del sistema 92 asistencia al cliente 120 conexión a internet 13 Asistencia de Illumina Proactive 14 configuración de audio 21 ausencia de llamadas 65-66 configuración de sonido 21 ayuda configuración del experimento técnica 120...
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Guía del sistema de secuenciación NextSeq 1000 y 2000 consumibles filtro de castidad 67 lectura 54 filtros de aire seguimiento 1 repuestos 30 Control PhiX v3 29 ubicación 89 conversión a FASTQ 63 fórmulas 86 fragmentos de fórmula 6 datos de rendimiento 13 datos de rendimiento del instrumento 13 garantía 30 degradar versión de software 96-97...
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13 puntuaciones Q 68 ubicaciones de grupos 63, 69 unidad D 85 unidades asignadas 53 ratón 4 Reactivos NextSeq 1000/2000 29 N.º de documento 1000000109376 v05 ESP Para uso exclusivo en investigación. Prohibido su uso en procedimientos de diagnóstico.
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Guía del sistema de secuenciación NextSeq 1000 y 2000 valores de intensidad 66 ventiladores 89 Visor del análisis de secuenciación 63, 65 Windows inicio de sesión 95 N.º de documento 1000000109376 v05 ESP Para uso exclusivo en investigación. Prohibido su uso en procedimientos de diagnóstico.
Asistencia técnica Si necesita asistencia técnica, póngase en contacto con el servicio de asistencia técnica de Illumina. Sitio web: www.illumina.com Correo electrónico: [email protected] Números del servicio de asistencia técnica de Illumina Región Teléfono gratuito Internacional Alemania +49 800 101 4940...
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Taiwán (China) +886 8 06651752 Vietnam +84 1206 5263 Hojas de datos de seguridad (SDS): disponibles en el sitio web de Illumina, support.illumina.com/sds.html. Documentación del producto: disponible para su descarga de support.illumina.com. N.º de documento 1000000109376 v05 ESP Para uso exclusivo en investigación. Prohibido su uso en procedimientos de diagnóstico.