Tabla de contenido
Guía del sistema de secuenciación NextSeq 2000
7.
Agite en vórtice brevemente y, a continuación, centrifugue a 280 × g durante un minuto.
Dilución de la biblioteca a 2 nM para la concentración de carga
1.
Combine los volúmenes siguientes en un microtubo de baja unión para preparar 24 µl de biblioteca
diluida con la concentración de carga correspondiente:
Tipo de biblioteca*
Ampliseq for Illumina
Library PLUS
Illumina DNA Prep
Illumina DNA Prep with
Enrichment
100 % PhiX
TruSeq DNA Nano 350
TruSeq DNA Nano 550
TruSeq Stranded mRNA
* En el caso de los tipos de biblioteca que no se encuentren en la lista, comience con una
concentración de carga de 650 pM y optimícela en experimentos posteriores.
En esta tabla, se proporcionan ejemplos de concentraciones de carga. NextSeq 2000 es compatible
con todos los kits de preparación de bibliotecas de Illumina, excepto los que requieren cebadores de
secuenciación personalizados, pero la concentración de carga óptima puede variar.
2.
Agite en vórtice brevemente y, a continuación, centrifugue a 280 × g durante un minuto.
3.
Reserve la biblioteca diluida en hielo hasta que esté listo para la secuenciación..
Secuencie las librerías diluidas a la concentración de carga el mismo día en que se diluyen.
4.
Continúe del modo indicado a continuación.
•
Si va a añadir PhiX, consulte
•
Si no va a añadir PhiX o va a realizar un experimento solo de PhiX, consulte
consumibles en el cartucho en la página
Adición de un control PhiX (opcional)
1.
Combine los siguientes volúmenes en un microtubo de baja unión para preparar 20 µl de PhiX a
1 nM:
•
PhiX a 10 nM (2 µl)
•
RSB (18 µl)
2.
Agite en vórtice brevemente y, a continuación, centrifugue a 280 × g durante un minuto.
3.
Añada 1 µl de PhiX a 1 nM a 24 µl de biblioteca diluida con la concentración de carga final.
Estos volúmenes producen un volumen adicional de PhiX de aproximadamente el 2 %. El porcentaje
real varía en función de la calidad y la cantidad de la biblioteca.
4.
Reserve la biblioteca con volumen adicional de PhiX en hielo hasta que esté listo para la
secuenciación.
Secuencie las bibliotecas con volumen adicional de PhiX el mismo día en el que se diluyen.
N.º de documento 1000000109376 v01 ESP
Para uso exclusivo en investigación.
Prohibido su uso en procedimientos de diagnóstico.
Concentración de
carga (pM)
biblioteca a 2 nM (µl)
750
750
1000
650
1200
1500
1000
Adición de un control PhiX (opcional) en la página
33.
Volumen de
Volumen de
9
9
12
7,8
14,4
18
12
Carga de
RSB (µl)
15
15
12
16,2
9,6
6
12
32.
32
Tabla de contenido
