Tabla de contenido
Guía del sistema de secuenciación NextSeq 2000
Generación de grupos
1
La biblioteca
se desnaturaliza de manera automática en cadenas individuales y se diluye
posteriormente en el instrumento. Durante la generación de grupos, las moléculas únicas de ADN se
unen a la superficie de la celda de flujo y se amplifican para formar grupos
dura aproximadamente 4 horas.
Secuenciación
Se adquieren imágenes de los grupos con composiciones químicas de dos canales, un canal verde y un
canal azul, para codificar los datos para los cuatro nucleótidos. Tras la adquisición de imágenes de una
placa en la celda de flujo, se procede a la adquisición de imágenes de la placa siguiente. El proceso se
repite para cada ciclo de secuenciación (5 minutos aproximadamente por ciclo). Después del análisis de
imágenes, el software de análisis en tiempo real ejecuta las llamadas de bases
4
puntuación de calidad.
Para obtener más información, consulte
Análisis principal
A medida que el experimento avanza, el software de control transfiere de forma automática archivos de
5
llamada de bases
(*.cbcl) a la carpeta de resultados especificada para el análisis de los datos. Durante
el experimento de secuenciación, el análisis en tiempo real (RTA3) ejecuta análisis de imágenes,
llamadas de bases y demultiplexado
secundario. El método de análisis de datos secundario depende de la configuración del sistema y de la
aplicación.
Análisis secundario
BaseSpace Sequence Hub es el entorno informático basado en la nube de Illumina para la supervisión
de experimentos, el análisis de los datos, el almacenamiento y la colaboración. Alberga DRAGEN y las
aplicaciones de BaseSpace Sequence Hub, que admiten los métodos de análisis comunes para la
secuenciación.
1
Una muestra de ADN o ARN con adaptadores adjuntos para la secuenciación. Los métodos de preparación varían.
2
Un grupo clónico de cadenas de ADN de una celda de flujo que produce una lectura de secuenciación. Cada cadena
de ADN de la celda de flujo genera una cadena molde que se amplifica hasta que el grupo consta de cientos o miles
de copias. Por ejemplo, una celda de flujo con 10 000 grupos produce 10 000 lecturas individuales o 20 000 lecturas
"paired-end".
3
Determina una base (A, C, G o T) para cada grupo de una placa determinada en un ciclo específico.
4
Predice la probabilidad de obtener una llamada de bases incorrecta. Una puntuación Q alta indica una llamada de
bases fiable.
5
Contiene la llamada de bases y la puntuación de calidad asociada a cada grupo de cada uno de los ciclos de
secuenciación.
6
Proceso de análisis que diferencia las lecturas de cada biblioteca de un grupo.
N.º de documento 1000000109376 v01 ESP
Para uso exclusivo en investigación.
Prohibido su uso en procedimientos de diagnóstico.
Llamada de bases en la página
6
. Una vez finalizada la secuenciación, comienza el análisis
2
. La generación de clústeres
3
, el filtrado y la
44.
8
Tabla de contenido
