Siemens Coat-A-Count TSH IRMA Manual Del Usuario página 15

Polystyrol-Röhrchen mit T
(Totalaktivität) beschriften.
Standards
A (NSB)
B
C
D
E
F
G
H ("MB")
Jeweils 200 µl der Standards,
2
Kontrollen und Patientenproben in die
vorbereiteten Röhrchen pipettieren.
Direkt auf den Boden des
Röhrchens pipettieren.
Patientenproben mit Konzentrationen
oberhalb des Messbereichs bis
60 µIU/ml müssen vor der Messung
mit 0-Standard verdünnt werden. Um
Verschleppung zu vermeiden, wird die
Verwendung von Einmal-Pipetten-
spitzen empfohlen. Verdrängungs-
pipetten, sowie automatische Pipettor-
Dilutoren sollten nur verwendet
werden, wenn eine mögliche
Verschleppung untersucht und für
vernachlässigbar befunden wurde
125
I TSH Antikörper in jedes
3 100 µl
Röhrchen hinzufügen.
Direkt auf den Boden pipettieren.
Vergewissern Sie sich, dass Probe
und Tracer gut gemischt sind, ohne
Schaumbildung. Die Verwendung
eines Dispensers wird empfohlen. Die
T-Röhrchen bis zur Messung (siehe
Schritt 6) beiseite stellen; sie bedürfen
keiner weiteren Behandlung.
2 Stunden auf einem Schüttler mit
4
200 Zyklen pro Minute bei
Raumtemperatur (15–28°C)
inkubieren.
Vollständig dekantieren. 2 ml
5
gepufferte Waschlösung in jedes
Röhrchen hinzufügen. 1–2 Minuten
stehen lassen, dann vollständig
dekantieren. Nochmals 2 ml
gepufferte Waschlösung in jedes
Röhrchen geben, 1–2 Minuten stehen
lassen, dann erneut vollständig
dekantieren.
Coat-A-Count TSH IRMA (PIIKTS-8, 2010-11-04)
µIU/ml
0
0,15
0,5
1,5
4
15
30
60
Vollständiges Entfernen der
Flüssigkeit verbessert die Präzision
deutlich. Nach dem 2. Waschgang,
mit Hilfe eines Dekantierständers alle
Röhrchen (außer die T-Röhrchen)
dekantieren und 2–3 Minuten umge-
dreht stehen lassen. Anschließend
werden die Röhrchen kräftig auf
Fließpapier ausgeklopft, um alle
restlichen Tröpfchen zu entfernen.
Alle Röhrchen 1 Minute im Gamma-
6
Counter messen.
In Mehrkanal-Gamma-Countern
sollten die T-Röhrchen mindestens
eine Position Abstand von den
übrigen Teströhrchen haben, um ein
Spillover zu vermeiden.
Berechnung der Ergebnisse
und Qualitätskontrolle
Um die Konzentrationen aus der Log-Log
Darstellung der Standardkurve abzulesen
werden zunächst der Mittelwert jedes
Röhrchenpaars, bereinigt um den
Mittelwert der NSB (Standard A) Counts
pro Minute (cpm) berechnet:
Netto Counts = (Mittelwert CPM) minus
(Mittelwert NSB CPM)
Anschließend wird die Bindung jedes
Röhrchenpaars als Prozent der
Maximalbindung (MB, B
(%B/MB). Hierzu werden die mittleren
CPM des H-Standards korrigiert um die
mittlere NSB als 100% gesetzt:
Prozentbindung = (Netto Counts / Netto MB
Counts) × 100
Die Prozentbindungen der Standards
werden gegen die Konzentration auf
Logarithmenpapier mit je 4 Dekaden
aufgetragen und durch eine Kurve mit
bestmöglicher Annäherung an diese
Punkte verbunden. (Die einzelnen
Standardpunkte sollten jeweils mit einem
Bogen oder einer geraden Linie aber nicht
durch eine gerade Linie durch alle Punkte
verbunden werden.) TSH Konzentrationen
innerhalb des Konzentrationsbereichs der
Standards können an der Kurve durch
Interpolation abgelesen werden. Die
Prozentbindungen der drei niedrigsten
Standards können zusätzlich auf linearem
Papier gegen die Konzentration
aufgetragen werden, um durch
) bestimmt
max
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