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Preparación del ARN transportador (CARRIER)
El ARN transportador (CARRIER) realiza dos funciones durante el procedimiento
de purificación. En primer lugar, mejora la unión de ácidos nucleicos virales y
del ADN bacteriano a la superficie de sílice de las partículas magnéticas,
especialmente si la muestra contiene muy poca cantidad de ácidos nucleicos.
En segundo lugar, la adición de grandes cantidades del ARN transportador
(CARRIER) reduce las probabilidades de degradación del ARN viral en el caso
inusual de que las ribonucleasas no hayan sido desnaturalizadas por los
detergentes y sales caotrópicas presentes en el tampón de lisis. Si el ARN
transportador (CARRIER) no es añadido a la reacción, la cantidad de ARN o
ADN viral o de ADN bacteriano obtenida puede verse reducida.
El ARN transportador (CARRIER) liofilizado incluido en el kit es suficiente para
48 preparaciones de muestras. La concentración del ARN transportador
(CARRIER) utilizado en el procedimiento de purificación permite que el kit EZ1
DSP Virus se utilice como un sistema de purificación genérico que es
compatible con muchos sistemas de amplificación diferentes y apto para la
purificación de ácidos nucleicos de una amplia variedad de bacterias y de virus
ADN y ARN. Sin embargo, los sistemas de amplificación varían en cuanto a la
eficiencia dependiendo de la calidad total de ácidos nucleicos presentes en la
reacción. Los eluidos obtenidos con este kit contienen ácidos nucleicos virales y
bacterianos y ARN transportador (CARRIER). En cada eluido, la cantidad del
ARN transportador (CARRIER) excede en gran medida la cantidad de ácidos
nucleicos virales y bacterianos. Para obtener los niveles más altos de
sensibilidad en reacciones de amplificación, puede que sea necesario ajustar la
cantidad la solución de ARN transportador (CARRIER) agregada.
Disuelva bien el ARN transportador (CARRIER) liofilizado en 310 µl de tampón
de elución (AVE), divídalo en alícuotas de volumen conveniente y almacene a –
20 ± 5 °C. No congele y descongele las alícuotas más de dos veces.
Para cada muestra procesada, diluya 3,6 µl de solución madre del ARN
transportador (CARRIER) en un volumen total de 60 µl utilizando tampón de
elución (AVE) (y/o solución de control interno). Un volumen de 50 µl de esta
solución de ARN transportador y tampón de elución (CARRIER–AVE) se
transfiere a la mezcla de lisis, correspondiendo a 3 µg de ARN transportador
(CARRIER).
Si quiere utilizar un control interno, vea "Uso de un control interno (IC)" a
continuación.
Nota: El procedimiento de purificación está optimizado para que se añadan
3 µg del ARN transportador (CARRIER) por muestra. Si se ha determinado que
una cantidad diferente de ARN transportador (CARRIER) da mejores resultados
en un sistema de amplificación específico, cambie el volumen de la solución
madre de ARN transportador (CARRIER) mezclada con el tampón de elución
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Manual de uso del kit EZ1 DSP Virus 03/2015
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