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Protocolo: Pretratamiento para el aislamiento del
ADN genómico de bacterias grampositivas
Para determinadas bacterias grampositivas se puede mejorar la extracción del
ADN mediante un pretratamiento enzimático antes de transferir la muestra a
un instrumento EZ1. Si las muestras son muy viscosas como, por ejemplo, un
esputo, se recomienda realizar la licuefacción según el protocolo para muestras
respiratorias antes de iniciar este protocolo. Este protocolo no está previsto
para utilizarse con heces o con muestras de sangre completa.
Procedimiento:
1. Sedimente las bacterias mediante centrifugación durante 10 minutos
± 1 minuto a 5000 x g (7500 rpm en una microcentrifugadora).
2. Suspenda el sedimento bacteriano en 180 µl de solución enzimática
(20 mg/ml de lisozima; 20 mM de Tris-HCl, pH 8,0; 2 mM de EDTA;
Triton X-100 al 1,2%) en un tubo de 2 ml con tapa de rosca.
3. Incube como mínimo durante 30 minutos a 37 °C ± 3 C.
4. Centrifugue brevemente el tubo para eliminar las gotas del interior
del tapón.
5. Proceda con el protocolo de purificación (página 30).
Manual de uso del kit EZ1 DSP Virus 03/2015
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