Tabla de contenido
Principios del procedimiento
La tecnología de partículas magnéticas combina la velocidad y eficiencia de la
purificación de ácidos nucleicos basada en sílice con la cómoda manipulación
de las partículas magnéticas. El procedimiento de purificación está diseñado
para garantizar una manipulación segura y reproducible de muestras
potencialmente infecciosas. La purificación consta de 4 pasos: lisis, unión,
lavado y elución (véanse los siguiente apartados y el organigrama). Es
importante realizar un pretratamiento de la muestra si se trata de orina, sangre
completa, heces, muestras respiratorias y frotis secos. Para el material de
muestra correspondiente, consulte el protocolo de pretratamiento.
Lisis con proteinasa K
La proteolisis de las muestras se realiza en condiciones altamente
desnaturalizantes a temperaturas elevadas. La lisis se efectúa en presencia de
proteinasa K y tampón de lisis, cuya combinación asegura la digestión de las
proteínas de la envoltura vírica y la inactivación de las nucleasas.
Unión a las partículas magnéticas
El tampón de unión se agrega a las muestras lisadas para ajustar las
condiciones de la unión. Los lisados se mezclan completamente con las
partículas magnéticas para permitir la absorción óptima de los ácidos nucleicos
virales y del ADN bacteriano a la superficie de la sílice. Sales y las condiciones
de pH aseguran que proteínas y otros contaminantes, que pueden inhibir la
PCR y otras reacciones enzimáticas posteriores, no se adhieran a las partículas
magnéticas.
Lavado de ácidos nucleicos ligados
Mientras que los ácidos nucleicos virales y el ADN bacteriano siguen ligados a
las partículas magnéticas, los contaminantes se eliminan de forma eficiente
durante una secuencia de pasos de lavado usando primero el tampón de
lavado 1, a continuación el tampón de lavado 2 y finalmente etanol.
Elución de ácidos nucleicos puros
En un solo paso, los ácidos nucleicos virales y el ADN bacteriano altamente
puros son eluidos en el tampón de elución (AVE). Los ácidos nucleicos
purificados se pueden utilizar en aplicaciones posteriores o almacenar para un
uso futuro.
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Manual de uso del kit EZ1 DSP Virus 03/2015
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