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Contaminación con ADN celular
El QIAamp DSP Viral RNA Mini Kit no se ha diseñado para separar el ARN vírico del ADN
celular y ambos se purificarán de forma paralela si están presentes en la muestra. Para evitar la
purificación conjunta del ADN celular, se recomienda el uso de líquidos y secreciones corporales
extracelulares para la preparación del ARN vírico. Las muestras que contienen células, como el
líquido cefalorraquídeo, la médula ósea, la orina y la mayoría de los frotis, primero se deben
filtrar o centrifugar durante 10 minutos a aproximadamente 1500 × g, así como el
sobrenadante utilizado. Si el ARN y el ADN se han aislado de forma paralela, el eluido se
podrá digerir con la ADNasa utilizando ADNasa sin ARNasas para posteriormente realizar un
tratamiento térmico (15 minutos ± 1 minuto, 70 °C ± 3 °C) a fin de inactivar la ADNasa.
Volumen de las muestras
El procedimiento QIAamp DSP Viral RNA se ha optimizado para su uso con muestras de
140 µl. Las muestras pequeñas se deben ajustar a 140 µl con tampón fosfato salino
(phosphate-buffered saline, PBS) antes de cargarlas, y las muestras con una baja
concentración vírica se deben concentrar a 140 µl antes de su procesamiento. Consulte el
apartado "Protocolo: Concentración de las muestras", en la página 32.
Lisis
En primer lugar, la muestra se lisa en condiciones altamente desnaturalizantes que proporciona
el Buffer AVL para inactivar las ARNasas y garantizar el aislamiento del ARN vírico intacto.
El ARN transportador que se ha añadido al Buffer AVL mejora la unión de ARN vírico con la
membrana QIAamp (especialmente en el caso de las muestras con concentración baja) y limita
la posible degradación del ARN vírico debido a la actividad de los residuos de ARNasas.
Instrucciones de uso del QIAamp DSP Viral RNA Mini Kit (manual de uso) 01/2021
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