Tabla de contenido
Procedimiento
Para efectuar el procedimiento manual con una microcentrifugadora, siga los pasos 1-11.
Este procedimiento se puede automatizar en dos distintas versiones:
Estándar: automatización completa con 140 µl de muestra (a partir del paso 1)
Lisis manual: automatización parcial con lisis manual fuera del instrumento (empezando
después del paso 4)
1. Pipetee 560 µl de Buffer AVL preparado que contenga ARN transportador en un tubo de
lisis (LT).
Si el volumen de la muestra es mayor a 140 µl, incremente la cantidad de Buffer AVL
y ARN transportador de manera proporcional (por ejemplo, una muestra de 280 µl
requerirá 1120 µl de Buffer AVL y ARN transportador) utilice un tubo más grande.
2. Añada 140 µl de plasma, suero, orina, sobrenadante de cultivo celular o líquidos
y secreciones corporales extracelulares a Buffer AVL y ARN transportador en el tubo de
lisis (LT). Mezcle mediante agitación vorticial de pulsos durante 15 segundos.
Para garantizar la eficiencia de la lisis, es fundamental que la muestra se mezcle bien con
el Buffer AVL a fin de obtener una solución homogénea. También se pueden utilizar las
muestras congeladas que únicamente se han descongelado una vez.
3. Incube a temperatura ambiente durante 10 minutos ± 1 minuto.
La lisis de la partícula vírica se finaliza después de haber lisado durante 10 minutos
a temperatura ambiente.
4. Centrifugue brevemente el tubo de lisis (LT) para eliminar las gotas del interior del tapón.
Nota: Si se ha realizado una lisis manual (pasos 1-4) fuera del instrumento, se pueden
automatizar los siguientes pasos (pasos 5-11) en los instrumentos QIAcube o QIAcube
Connect MDx siguiendo las instrucciones que aparecen en la pantalla para el protocolo
Lisis manual.
5. Añada 560 µl de etanol (96-100 %) a la muestra, mezcle mediante agitación vorticial de
pulsos durante al menos 15 segundos. Una vez finalizada la mezcla, centrifugue
brevemente el tubo para eliminar las gotas del interior de la tapa.
34
Instrucciones de uso del QIAamp DSP Viral RNA Mini Kit (manual de uso) 01/2021
Tabla de contenido
