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Tanques de electroforesis
Los tanques de electroforesis se deben limpiar con una solución de detergente (p. ej.,
dodecilsulfato sódico [sodium dodecyl sulfate, SDS] al 0,5 %)*, enjuagar con agua, secar
con etanol*
y llenar, a continuación, con una solución de H
*
10 minutos a temperatura ambiente, los tanques de electroforesis se deben enjuagar
meticulosamente con agua sin ARNasas.
Soluciones
Las soluciones (agua y otras soluciones)* se deben tratar con dietilpirocarbonato
(diethylpyrocarbonate, DEPC) al 0,1 %. El dietilpirocarbonato (diethylpyrocarbonate, DEPC)
reaccionará con las aminas primarias y no puede utilizarse directamente para tratar los
tampones Tris*. El DEPC es altamente inestable en presencia de tampones Tris y se
descompone rápidamente en etanol y CO
trate el agua con DEPC y, a continuación, disuelva el Tris para preparar el tampón adecuado.
El DEPC es un inhibidor potente, pero no absoluto, de las ARNasas. Se utiliza habitualmente
a una concentración del 0,1 % para inactivar las ARNasas en materiales de vidrio o de
plástico o para preparar soluciones y agua sin ARNasas. El DEPC inactiva las ARNasas por
medio de una modificación covalente. Las cantidades mínimas de DECP modificarán los
residuos de purinas en el ARN por medio de una carbetoxilación. El ARN carbetoxilado se
convierte con una eficacia muy baja en sistemas libres de células. No obstante, su capacidad
de formar híbridos de ADN:ARN o ARN:ARN no se ve seriamente afectada, salvo que se
haya modificado una gran fracción de residuos de purinas. El dietilpirocarbonato
(diethylpyrocarbonate, DEPC) residual siempre se debe eliminar de las soluciones o de los
recipientes en el autoclave o calentándolos a 100 °C durante 15 minutos.
Los plásticos utilizados para determinados tanques de electroforesis no son resistentes al etanol. Preste la atención
*
debida y consulte las instrucciones de los proveedores.
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. Cuando prepare tampones Tris, en primer lugar
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Instrucciones de uso del QIAamp DSP Viral RNA Mini Kit (manual de uso) 01/2021
O
al 3 %.* Después de
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