BD ProbeTec Manual Del Usario página 74

El análisis de ADN amplificado BD ProbeTec CT Q
analizado mediante cebadores de amplificación y una sonda de detección marcada con fluorescencia
de SDA se deshidratan en dos micropocillos desechables diferentes: el micropocillo de cebado, que contiene los
cebadores de amplificación, la sonda de detección marcada con fluorescencia, nucleótidos y otros reactivos necesarios
para la amplificación, y el micropocillo de amplificación, que contiene las dos enzimas (una ADN polimerasa y una
endonucleasa de restricción) necesarias para la amplificación por desplazamiento de cadenas (SDA). El sistema
BD Viper pipetea una parte de la solución de ADN purificado de cada tubo de extracción y la transfiere a un
micropocillo de cebado para rehidratar el contenido. Tras un breve período de incubación, la mezcla de reacción se
transfiere al micropocillo de amplificación correspondiente, calentado con anterioridad, que a continuación se cierra
herméticamente para evitar la contaminación y, por último, se incuba en uno de los dos lectores de fluorescencia
con control térmico. La presencia o ausencia de ADN de C. trachomatis se determina mediante el cálculo del valor
máximo de fluorescencia (Unidades de fluorescencia relativa máxima [MaxRFU]) durante el transcurso del proceso de
amplificación y la posterior comparación de este valor con un valor umbral predeterminado.
Además de la sonda de detección de fluorescencia utilizada para detectar ADN de C. trachomatis amplificado, el
procedimiento añade a cada reacción un segundo oligonucleótido marcado con fluorescencia. Este oligonucleótido
del control de extracción se marca con un pigmento distinto al utilizado para la detección del ADN de C. trachomatis
y su función es confirmar la validez del proceso de extracción. El control de extracción se deshidrata en los tubos de
extracción y se hidrata de nuevo una vez que se han añadido tanto la muestra como los reactivos de extracción. Al
final del proceso de extracción, el instrumento BD Viper supervisa la fluorescencia del control de extracción y aplica
un algoritmo automatizado a las señales específicas del control de extracción y de C. trachomatis para comunicar el
resultado de la muestra como positivo, negativo o fallo del control de extracción.
REACTIVOS
Cada juego de reactivos BD ProbeTec CT Q
CT Q x Amplified DNA Assay Priming Microwells, 12 x 96: cada micropocillo de cebado contiene oligonucleótidos
(aproximadamente 110 pmol), sonda de detección marcada con fluorescencia (aproximadamente 45 pmol), dNTP
(80 nmol), estabilizantes y otros componentes de tampones.
CT Q x Amplified DNA Assay Amplification Microwells, 12 x 96: cada micropocillo de amplificación contiene ADN
polimerasa (aproximadamente 100 unidades) y enzima de restricción (aproximadamente 620 unidades), estabilizantes
y otros componentes de tampones.
NOTA: cada bolsa de micropocillos contiene una bolsa con secante.
Control Set for the BD ProbeTec CT/GC Q
contienen aproximadamente 2.400 copias de plásmidos linealizados pCTB4 y pGCint3 en ácido nucleico portador, y
24 tubos de control negativo de CT/GC Q
los plásmidos pCTB4 y pGCint3 se determinan mediante espectrofotometría ultravioleta.
CT/GC Q x Swab Diluent for the BD ProbeTec CT/GC Q
aproximadamente 2 mL de tampón de fosfato potásico/hidróxido potásico con DMSO y conservantes.
BD FOX Extraction Tubes for the BD ProbeTec CT/GC Q
contiene óxido férrico (aproximadamente 10 mg) en una película soluble y oligonucleótido de control de extracción
marcado con fluorescencia (aproximadamente 240 pmol).
Extraction Reagent and Lysis Trough for the BD ProbeTec CT/GC Q
extracción de cuatro cavidades contiene aproximadamente 16,5 mL de ácido de fijación, 117 mL de tampón de lavado,
35 mL de tampón de elusión y 29 mL de tampón de neutralización, con conservantes; a su vez, cada cubeta de lisis
contiene aproximadamente 11,5 mL de reactivo de lisis.
INSTRUMENTO, EQUIPO Y MATERIALES
Materiales suministrados: BD Viper Instrument, BD Viper Instrument Plates, BD Viper Pipette Tips, BD Viper Tip
Waste Boxes, BD Viper Amplification Plate Sealers (Black), BD Viper Lysing Heater, BD Viper Lysing Rack, BD Viper
Neutralization Pouches, Specimen Tubes and Caps for use on the BD Viper (Extracted Mode), Urine Preservative
Transport for the BD ProbeTec Q
BD ProbeTec CT/GC Q x Amplified DNA Assays, Male Urethral Specimen Collection Kit for the BD ProbeTec CT/GC Q
Amplified DNA Assays, Vaginal Specimen Transport for the BD ProbeTec CT/GC Q
Accessories.
Materiales necesarios pero no suministrados: guantes de nitrilo, hipoclorito sódico al 1% (v/v)*, DNA AWAY, peróxido
de hidrógeno al 3% (p/v), Chlamydia trachomatis ATCC VR-902B (diluido en solución salina tamponada con fosfato) o
Blackhawk AmpliTrol CT/GC.
*Mezclar 200 mL de lejía con 800 mL de agua. Preparar una mezcla nueva diariamente.
Requisitos de conservación y manipulación: los reactivos pueden conservarse a una temperatura de 2 – 33 °C. Los
juegos de reactivos sin abrir son estables hasta la fecha de caducidad. Una vez abierta una bolsa, los micropocillos son
estables durante 6 semanas si se cierran de manera apropiada o hasta la fecha de caducidad, lo que suceda antes. No
congelar.
Advertencias y precauciones
Generalidades:
1. Para uso diagnóstico in vitro.
2. En las muestras clínicas puede haber microorganismos patógenos, como los virus de la hepatitis y el virus de
la inmunodeficiencia humana. Para la manipulación de todos los elementos contaminados con sangre u otros
líquidos corporales deben seguirse las "Precauciones estándar"
3. Para conocer las advertencias, precauciones y notas adicionales específicas de BD Viper, consultar el Manual del
usuario del sistema BD Viper.
x se basa en la amplificación y la detección simultáneas del ADN
x Reagent Pack contiene:
x
Amplified DNA Assays: 24 tubos de control positivo de CT/GC Q
x , que contienen únicamente ácido nucleico portador. Las concentraciones de
x Amplified DNA Assays: 48 tubos; cada uno de ellos contiene un
x
Amplified DNA Assays: 48 tiras de 8 tubos; cada uno de ellos
x
Amplified DNA Assays (Q
x Amplified DNA Assays: cada cubeta de reactivo de
x
UPT), Female Endocervical Specimen Collection Kit for the
x
10-13 y las directrices del centro.
73
8,9
. Los reactivos
Amplified DNA Assay y BD ProbeTec
x
, que
x