Carga De Bibliotecas En La Celda De Flujo - Illumina NovaSeq 6000 Guia Del Usuario

Guía del sistema de secuenciación NovaSeq 6000
Las causas más comunes de la variación en los resultados cuando se mezclan los reactivos ExAmp
manualmente son la entrega imprecisa de volúmenes y una mezcla insuficiente. No mezcle menos de lo
normal.
1 Invierta o agite brevemente en un vórtice para mezclar DPX1 y DPX2.
2 Agite brevemente para mezclar también DPX3.
Los reactivos ExAmp podrían estar separados en el almacenamiento. Son viscosos, en especial DPX2 y
DPX3. DPX3 no se mezcla fácilmente cuando se invierte debido a su alta viscosidad.
3 Centrifugue brevemente DPX1, DPX2 y DPX3.
4 Combine los siguientes volúmenes en un tubo de microcentrifugado apropiado en el orden especificado.
Orden de
Reactivo*
adición
1 DPX1
2 DPX2
3 DPX3
* Los tapones de los tubos de reactivo DPX pueden estar clasificados por colores (rojo, amarillo y azul para DPX1, DPX2 y DPX3,
respectivamente). Asegúrese de que la codificación por color se mantiene cuando se sustituyen los tapones de los tubos.
Estos volúmenes proporcionan un resultado de mezcla maestra ExAmp de 210 µl para los modos SP, S1
o S2 o de 525 µl para el modo S4. Estos volúmenes son suficientes para el modo aplicable. Se incluye un
volumen mayor para representar los errores de pipeteo al cargar las bibliotecas en la celda de flujo.
5 Pipetee y dispense lentamente para evitar la formación de burbujas y asegurarse de que el volumen
íntegro se expulsa desde la punta.
6 Agite con un vórtice entre 20 y 30 segundos o hasta que esté bien mezclado.
NOTA
La mezcla maestra de ExAmp es estable para agitarla en un vórtice.
La mezcla podría parecer turbia, lo cual es normal.
7 Centrifugue a 280 × g, como máximo, hasta 1 minuto.
8 Para lograr un mejor rendimiento de la secuenciación, prosiga de inmediato con el siguiente paso.
Si fuera necesario, el almacenamiento ideal de la mezcla maestra es de hasta 1 hora en hielo. Si la
almacena a temperatura ambiente, utilícela en un plazo máximo de 30 minutos.

Carga de bibliotecas en la celda de flujo

Para obtener mejores resultados, haga lo siguiente:
Mantenga la celda de flujo cargada a temperatura ambiente. No la refrigere ni la ponga en hielo.
u
Una incubación prolongada podría reducir el porcentaje de grupos que superan el filtro (% de superación
u
de filtro).
Inicie el experimento dentro de los 30 minutos siguientes a la carga de los grupos de bibliotecas en la
u
celda de flujo.
El uso inmediato de la mezcla de ExAmp y de bibliotecas ofrece mejores resultados.
u
N.º de documento 1000000019358 v11 ESP N.º de material 20023471
Para uso exclusivo en investigación.
Prohibido su uso en procedimientos de diagnóstico.
Volumen para celda de flujo de dos
carriles (SP/S1/S2) (µl)
126
18
66
Volumen para celda de flujo de
cuatro carriles (S4) (µl)
315
45
165
48