Illumina NovaSeq 6000 Guia Del Usuario página 44

Guía del sistema de secuenciación NovaSeq 6000
NOTA
Para las bibliotecas generadas a partir de métodos de preparación de bibliotecas distintos a los de Illumina,
puede que tenga que llevar a cabo inicialmente una valoración de su tipo de biblioteca específico con el fin
de obtener una concentración de inoculación óptima para producir el mejor % de superación de filtro.
Cuando se determina una concentración de carga óptima, esta debería aplicarse a todos los tipos de
bibliotecas idénticos en el futuro.
Tabla 13 Concentraciones de carga recomendadas para el flujo de trabajo de NovaSeq Standard (versión de
software 1.1 o posterior)
Tipo de biblioteca
PhiX¹
Grupo de bibliotecas de ADN sin PCR
Grupo de bibliotecas de ADN amplificadas
por PCR
Celda única²
¹ Para un experimento solo de PhiX.
² La celda única se ha verificado solo para el flujo de trabajo Xp.
Si ha optimizado una concentración de carga final para HiSeq™ X, HiSeq™ 4000 o HiSeq™ 3000, utilice 1,5
veces esa concentración para NovaSeq 6000. Por ejemplo, si su concentración de carga final para HiSeq X
es de 200 pM, utilice 300 pM en NovaSeq 6000.
Agrupación de bibliotecas normalizadas y adición de control PhiX opcional
1 Combine el volumen adecuado de cada biblioteca normalizada en un tubo de microcentrifugado nuevo
para generar uno de los siguientes volúmenes finales:
Modo
SP/S1
S2
S4
Por ejemplo, para un grupo de seis bibliotecas y el modo S2, combine 25 µl de cada biblioteca
normalizada con la misma concentración. O, para un grupo de cuatro bibliotecas y el modo S1, combine
25 µl de cada biblioteca normalizada no desnaturalizada.
2 [Opcional] Almacene las bibliotecas restantes no agrupadas a una temperatura de entre –25 °C y –15 °C.
3 [Opcional] Enriquezca con 1 % de PhiX no desnaturalizado como se indica a continuación.
a Diluya 10 nM de PhiX a 2,5 nM con 10 mM de Tris-HCl, pH 8,5.
b Añada el volumen adecuado de control PhiX a 2,5 nM no desnaturalizado al tubo del grupo de
bibliotecas no desnaturalizadas.
Modo PhiX a 2,5 nM no desnaturalizado (µl)
SP/S1
S2
S4
N.º de documento 1000000019358 v11 ESP N.º de material 20023471
Para uso exclusivo en investigación.
Prohibido su uso en procedimientos de diagnóstico.
Concentración final de carga
175-350
300-600
250–500
Volumen final (µl)
100
150
310
0,6
0,9
1,9
Concentración de carga de
(pM)
250
Biblioteca no desnaturalizada (µl)
100
150
310
grupos (nM)
1,25
0,875-1,75
1,5-3,0
1,25–2,5
35