Preparación De Una Dilución Nueva De Naoh; Desnaturalización De Grupos De Bibliotecas Y Control Phix Opcional - Illumina NovaSeq 6000 Guia Del Usuario

Guía del sistema de secuenciación NovaSeq 6000
Cuando añada el control PhiX, el 1 % es la cantidad recomendada para lograr bibliotecas bien
equilibradas. Es posible que las bibliotecas de baja diversidad necesiten más. Para utilizar un control
PhiX con bibliotecas de baja diversidad, póngase en contacto con el servicio de asistencia técnica de
Illumina para que le orienten.
Preparación de una dilución nueva de NaOH
Prepare una dilución nueva de NaOH a 0,2 N para desnaturalizar las bibliotecas para la secuenciación. Para
evitar que pequeños errores de pipeteado afecten a la concentración final de NaOH , se preparará un
volumen mayor.
PRECAUCIÓN
El NaOH a 0,2 N recién diluido es fundamental para el proceso de desnaturalización. La desnaturalización
inadecuada puede reducir el rendimiento.
1 Combine los siguientes volúmenes en un tubo de microcentrifugado para diluir 1 N de NaOH a 0,2 N:
Tabla 14 Modo SP/S1/S2
Reactivo
Agua de laboratorio
Preparado de
NaOH 1 N
Estos volúmenes producen 50 µl de NaOH a 0,2 N para una celda de flujo y 100 µl de NaOH a 0,2 N para
dos celdas de flujo.
Tabla 15 Modo S4
Reactivo
Agua de laboratorio
Preparado de
NaOH 1 N
Estos volúmenes producen 100 µl de NaOH a 0,2 N para una celda de flujo y 200 µl de NaOH a 0,2 N
para dos celdas de flujo.
2 Invierta varias veces para agitar o mezcle bien. Mantenga el tubo tapado y utilícelo en un plazo máximo
de 12 horas.
Desnaturalización de grupos de bibliotecas y control PhiX opcional
1 Añada NaOH a 0,2 N al tubo del grupo de bibliotecas no desnaturalizadas y un control PhiX opcional, tal
como se describe a continuación.
Celda de NaOH a
flujo
SP/S1
S2
S4
2 Tape y mezcle bien brevemente.
3 Centrifugue a 280 × g durante un minuto como máximo.
4 Incube a temperatura ambiente durante 8 minutos para desnaturalizar.
N.º de documento 1000000019358 v11 ESP N.º de material 20023471
Para uso exclusivo en investigación.
Prohibido su uso en procedimientos de diagnóstico.
Volumen para una celda de flujo
(µl)
40
10
Volumen para una celda de flujo
(µl)
80
20
Biblioteca no desnaturalizada (µl)
0,2 N
25
37
77
Volumen para dos celdas de flujo
Volumen para dos celdas de flujo
Volumen resultante
100 125 µl o 125,6 µl con PhiX
150 187 µl o 187,9 µl con PhiX
310 387 µl o 388,9 µl con PhiX
(µl)
80
20
(µl)
160
40
36