Tabla de contenido
Guía del sistema HiSeq 2000
1
Mida los siguientes volúmenes de EDP, ICB y LFN para cada 10 ciclos de la secuenciación que vaya a
realizar en la Lectura 1.
Reactivo
Volumen por 10 ciclos
ICB
4,57 ml
LFN
0,6 ml
EDP
0,11 ml
2
Transfiera el volumen de ICB medido a una botella de 250 ml vacía.
3
Añada el volumen de LFN medido a la nueva botella de ICB.
4
Enjuague cada tubo de LFN con ICB para garantizar la transferencia de todo el LFN.
5
Añada el volumen de EDP medido a la solución de ICB y LFN.
6
Enjuague el tubo de EDP con la solución de ICB y LFN para asegurarse de que se transfiera todo el EDP.
7
Cierre la botella que contiene EDP, ICB y LFN, e inviértala para mezclarla.
8
Déjela reposar en hielo.
Ejemplo de cálculo
Un experimento "paired-end" de doble índice de 101 ciclos tiene un total de 225 ciclos:
124 ciclos (101 + 8 + 7 + 8) para la Lectura 1 y las lecturas del índice
u
101 ciclos para la Lectura 2
u
Lectura 1 y lecturas del índice (124 ciclos)
124 ciclos / 10 ciclos = 12,4
• ICB: 12,4 × 4,57 ml = 56,9 ml
• LFN: 12,4 × 0,6 ml = 7,44 ml
• EDP: 12,4 × 0,11 ml = 1,36 ml
Utilice el mismo cálculo para cualquier experimento de doble índice. Base el cálculo en el número total de
ciclos en la Lectura 1 y las lecturas del índice, y el número total de ciclos en la Lectura 2. En el caso de
experimentos "paired-end" de doble índice, incluya los siete ciclos de solo química en la Lectura de índice 2.
Preparación de los reactivos de indexado
Se utilizan reactivos de indexado durante las lecturas de índice de un experimento de secuenciación
indexado. Prepare los reactivos adecuados para el tipo de experimento y el tipo de biblioteca.
Tipo de experimento
Un solo índice
"Paired-end" de doble índice
"Single-read" (de lectura individual) de
doble índice
* Se suministra en la caja TruSeq Dual Index Sequencing Primer Box.
N.º de documento 15011190 v02 ESP
Para uso exclusivo en investigación. Prohibido su uso en procedimientos de diagnóstico.
Almacenamiento
Entre 2 °C y 8 °C
Entre –25 °C y –15 °C
Entre –25 °C y –15 °C
Lectura 2 (101 ciclos)
101 ciclos / 10 ciclos = 10
• ICB: 10 × 4,57 ml = 45,7 ml
• LFN: 10 × 0,6 ml = 6 ml
• EDP: 10 × 0,11 ml =1,1 ml
Tipo de biblioteca
Todas las bibliotecas, excepto Nextera
Bibliotecas de Nextera
Todas las bibliotecas, excepto Nextera
Bibliotecas de Nextera
Todas las bibliotecas, excepto Nextera
Bibliotecas de Nextera
Índice 1 (i7)
Índice 2 (i5)
HP8
--
HP14*
--
HP8
RMR
HP14*
RMR
HP8
HP9*
HP14*
HP9*
33
Capítulos
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