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Instructions For Use
SAS-1 Immunofix
Cat. No. 200300
SAS-1 Immunofix
Fiche technique
Réf. 200300
SAS-1 Immunofixation
Anleitung
Kat. Nr. 200300
SAS-1 Immunofissazione
Istruzioni per l'uso
Cod. 200300
SAS-1 Inmunofijación
Instrucciones de uso
N o de catálogo 200300
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Resumen de contenidos para helena BioSciences SAS-1 Immunofix
- Página 1 BioSciences Europe www.helena-biosciences.com Instructions For Use SAS-1 Immunofix Cat. No. 200300 SAS-1 Immunofix Fiche technique Réf. 200300 SAS-1 Immunofixation Anleitung Kat. Nr. 200300 SAS-1 Immunofissazione Istruzioni per l’uso Cod. 200300 SAS-1 Inmunofijación Instrucciones de uso N o de catálogo 200300...
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Página 3: Intended Purpose
SAS-1 IMMUNOFIX INTENDED PURPOSE The SAS-1 IFE kit is intended for the separation and identification of monoclonal gammopathies by agarose gel electrophoresis. Immunofixation electrophoresis (IFE) is a two stage procedure using high resolution agarose electrophoresis in the first stage, and immunoprecipitation in the second phase. - Página 4 4. Wash Solution Contains 100ml of concentrated Wash Solution. Dilute 20ml to 1 litre with saline solution. 5. Sample Diluent Contains Tris / Barbital buffer with bromophenol blue and sodium azide as preservative. The diluent is ready for use as packaged. 6.
- Página 5 SAS-1 IMMUNOFIX ITEMS REQUIRED BUT NOT PROVIDED Cat. No. 210200 Sample Applicator Blades (1 x 10) Cat. No. 210300 Sample Applicator Blades (5 x 10) Cat. No. 210100 Disposable sample cups (100) Cat. No. 5014 Development Weight (2.3kg) Cat. No. 3100 REP Prep Drying oven with forced air capable of 60...70°C.
- Página 6 i i i i ) ) S S A A S S - - 1 1 P P l l u u s s u u s s e e r r s s : : dispense 400µL of REP Prep onto the heat sink. Place the gel onto the heat sink, agarose side up, aligning the positive and negative sides with the corresponding electrode posts, taking care to avoid air bubbles under the gel.
- Página 7 SAS-1 IMMUNOFIX 10. Following incubation, place a blotter comb into the holes of the antiserum template. Allow 2 minutes for the excess antisera to be absorbed, then remove the blotter combs and the template from the gel surface. 11. i i ) ) S S A A S S - - 1 1 u u s s e e r r s s : : Remove the gel blocks using the Gel Block Remover and wash the gel in wash solution for 5 minutes.
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Página 8: Interpretation Of Results
A band can also be seen within a polyclonal background when there is a large polyclonal immunoglobulin presence also. The publication 'Immunofixation for the Identification of Monoclonal Gammopathies' is available from Helena BioSciences on request. Urine Immunofixation: Type of Proteinuria... -
Página 9: Performance Characteristics
SAS-1 IMMUNOFIX IgM monoclonal proteins can adhere to the gel matrix. A band will appear in all 5 antiserum lanes of the gel. However, where the band reacts with a specific antiserum for the heavy chain and light chain, there will be an increase in size and staining intensity of the band, allowing the immunoglobulin type to be identified. -
Página 10: Quality Control
QUALITY CONTROL Helena Biosciences IFE Control Kit (Cat. No. 9400) can be used to confirm the presence of monoclonal banding in all antisera lanes. Helena Biosciences Kemtrol Abnormal Serum Control (Cat. No. 7025) can be diluted 1 in 100 and used as a positive control for Urine IFE. - Página 11 SAS-1 IMMUNOFIX UTILISATION Le kit SAS-1 IFE est utilisé pour la séparation et l'identification des gammapathies monoclonales par électrophorèse en gel d'agarose. L'immunofixation (IFE) est une procédure en deux étapes utilisant l'électrophorèse haute résolution en gel d'agarose dans en premier temps puis l'immunoprécipitation dans un deuxième temps.
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Página 12: Stockage Et Conservation
3. Solution décolorante Diluer le contenu de décolorant A avec 1 litre d’eau distillée. Ajouter ensuite le contenu de décolorant B puis, lentement, 1 autres litre d’eau distillée. Solution de lavage Contient 100ml de solution de lavage concentrée. Diluer 20ml dans 1 litres de solution saline. 5. - Página 13 SAS-1 IMMUNOFIX MATERIELS NECESSAIRES NON FOURNIS Réf. 210200 Applicateurs échantillons 1 x 10 Réf. 210300 Applicateurs échantillons 5 x 10 Réf. 210100 Cupules échantillons jetables 100 Réf. 5014 Poids à développement (2.3kg) Réf. 3100 REP Prep Etuve ventilée jusqu’à 70°C Solution saline (0.85% NaCl)
- Página 14 P P o o u u r r l l e e s s u u t t i i l l i i s s a a t t e e u u r r s s S S A A S S - - 1 1 P P l l u u s s : : Déposer 400µl de REP-prep dans le dissipateur thermique. Placer i i i i ) ) le gel sur le dissipateur thermique, agarose vers le haut, en respectant les polarités.
- Página 15 SAS-1 IMMUNOFIX 10. A la fin du temps d'incubation, déposer 1 buvard peigne dans les trous du masque antisérum. Laisser 2 minutes afin que l'excès d'antisérum soit absorbé, ensuite retirer le peigne ainsi que le masque antisérum de la surface du gel.
- Página 16 Un bande peut aussi être détectée dans un bruit de fond polyclonal lorsqu'il y a également augmentation polylconale des immunoglobulines. La publication "Immunofixation for the identification of Monoclonal Gammapathies" est disponible auprès d'Helena BioSciences sur demande. Immunofixation urinaire Bandes observées sur le gel Protéines présentes Urine Normale Fine bande d’albumine...
- Página 17 SAS-1 IMMUNOFIX LIMITES 1. Excès d'antigène. L'excès d'antigène se produit lorsqu'il n'y a un manque d'excès d'anticorps ou une faible équivalence antigène / anticorps au niveau du site de précipitation. L'excès d'antigène en IFE est essentiellement du à un excès d'immunoglobuline dans le sérum du patient. Cet excès se caractérise par un "effet de zone"...
- Página 18 5. Pas de réaction avec les chaînes légères Kappa ou Lambda. Occasionnellement un échantillon peut présenter une absence de réponse en chaîne légère malgré la réponse en chaîne lourde. Dans ce cas, il convient d'éliminer a) Maladie des chaînes lourdes, b) Très forte concentration de chaînes légères, induisant un excès d'antigène, c) faible concentration de chaînes légères, d) chaînes légères atypiques ne réagissant pas avec les antiséra courants, e) chaînes légères avec des déterminants antigéniques "cachés"...
- Página 19 SAS-1 IMMUNOFIXATION ANWENDUNGSBEREICH Der SAS-1 IFE Kit dient zur Auftrennung und Identifizierung von monoklonalen Gammopathien durch Agarosegel- Elektrophorese. Immunfixationselektrophorese (IFE) läuft in zwei Phasen ab. Die erste Phase verwendet Agarose- Elektrophorese in hoher Auflösung, gefolgt von Immunpräzipitation in der zweiten Phase. Der größte Anwendungsbedarf für IFE liegt im klinischen Laborbereich, hier vor allem in der Diagnose von monoklonalen Gammopathien.
- Página 20 INHALT 1. SAS-1 IFE-Gel Enthält Agarose in einem Tris / Barbitalpuffer mit Thiomersal und Natriumazid als Konservierungsmittel. Das Gel ist gebrauchsfertig verpackt. 2. Säures-Violett-Farbstoff Enthält eine konzentrierte Säures-Violett-Farbstoff-Lösung. Den Inhalt der Flasche mit 700ml dest. Wasser verdünnen. über Nacht rühren und vor dem Gebrauch filtern. Lagerung des Farbstoffs in einer fest verschlossenen Flasche.
- Página 21 SAS-1 IMMUNOFIXATION 5. Verdünnungsmittel Das Verdünnungsmittel sollte bei 15...30°C gelagert werden und ist bis zum aufgedruckten Verfallsdatum stabil. Trübung kann auf den Verfall der Entfärbelösung hinweisen. 6. SAS-1 IFE Antiseren Kit Der Antiseren Kit sollte bei 2...6°C gelagert werden und ist bis zum aufgedruckten Verfallsdatum stabil.
- Página 22 SCHRITT-FÜR-SCHRITT METHODE 1. Pipettieren Sie 35µl der Probe in die geeignete Vertiefung der Probenschale SAS-1 oder der Einweg- Probenbecher. i i ) ) N N u u r r f f ü ü r r S S A A S S - - 1 1 u u n n d d S S A A S S - - 1 1 P P l l u u s s : : Stellen Sie die Probenschale vorsichtig auf den Applikatoreinschub. Achten Sie darauf, dass die Schale fest in Position ist.
- Página 23 SAS-1 IMMUNOFIXATION 7. Am Ende der Elektrophorese ( ( N N u u r r f f ü ü r r S S A A S S - - 1 1 P P l l u u s s : : Abdeckung entfernen), entfernen Sie die Elektroden von der Geloberfläche.
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Página 24: Interpretation Der Ergebnisse
17. Wählen Sie das IFE-Testprogramm auf der Färbeeinheit an. Folgen Sie den Anweisungen und waschen, färben und trocknen Sie das Gel. a) SAS-2 (F F ä ä r r b b e e k k a a m m m m e e r r ) S S c c h h r r i i t t t t L L ö... - Página 25 SAS-1 IMMUNOFIXATION Die Veröffentlichung 'Immunofixation for the Identification of Monoclonal Gammopathies' ist auf Anfrage bei Helena BioSciences erhältlich. Urin-Immunfixation: Typ der Proteinurie Auf dem Gel beobachtete Banden Vorhandene Proteine Normales Urin Kleine Albuminbande Albumin Glomerulär Albumin, Alpha-1, Albumin, Alpha-1 Beta, Gamma...
- Página 26 Eine Anzahl Proben wurden mit dieser Methode und einem anderen kommerziell erhältlichen Testkit analysiert und die erhaltenen Meßwerte verglichen. Beide Methoden liefern übereinstimmende Resultate. Die abnormale Serumkontrolle von Helena Biosciences Kemtrol (Kat. Nr. 7025) kann 1 + 100 verdünnt und für IFE im Urin als Positivkontrolle verwendet werden.
- Página 27 SAS-1 IMMUNOFIXATION LITERATUR Fauchier, P. and Catalan, F. ‘Interpretive Guide to Clinical Electrophoresis’ Alfred Fournier Institute, Paris, France, 1988. Killingsworth, L.M., Cooney, S.K. and Tyllia, M.M. ‘Finding Clues to Disease in Urine’ Diagnostic Medicine, 1980 ; May/June : 69-75. Umbreit, A. and Wiedemann, G. ‘Determination of Urinary Protein Fractions. A Comparison With Different Electrophoretic Methods and Quantitatively Determined Protein Concentrations’...
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Página 28: Avvertenze E Precauzioni
PRINCIPIO Il kit SAS-1 Immunofix è stato formulato per la separazione ed identificazione delle gammopatie monoclonali mediante elettroforesi proteica su gel di agarosio. L'immunofissazione (IFE) è una procedura che avviene in 2 passaggi: inizialmente viene eseguita un elettroforesi ad alta risoluzione, successivamente avviene l'immunoprecipitazione. - Página 29 SAS-1 IMMUNOFISSAZIONE 4. Soluzione di lavaggio Contiene 100ml di soluzione di lavaggio concentrata. Diluire 20ml in 1 litri di soluzione fisiologica. 5. Soluzione diluente campione Contiene di tampone Tris / Barbital con l'aggiunta di blu di bromofenolo e sodio azide come conservante.
- Página 30 MATERIALE RICHIESTO MA NON FORNITO Cod. 210200 Applicatori 1 x 10 Cod. 210300 Applicatori 5 x 10 Cod. 210100 Cuvetter portacampioni, monouso 100 Cod. 5014 peso di suiloppo (2.3kg) Cod. 3100 REP Prep Forno ad aria forzata con temperature fino a 70°C. Soluzione fisiologica (0.85% NaCl) I seguenti articoli non sono necessari per una IFE SIERO standard, ma possono essere richiesti per ulteriori indagini e per le IFE URINE.
- Página 31 SAS-1 IMMUNOFISSAZIONE PROCEDURA Pipettare 35µl di ogni campione nelle apposite cuvette portacampioni SAS-1. i i ) ) S S o o l l o o p p e e r r S S A A S S - - 1 1 e e S S A A S S - - 1 1 P P l l u u s s : : Posizionare gentilmente il portacampioni nel cassetto dell’applicatore.
- Página 32 7. Alla termine dell'elettroforesi, ( ( S S o o l l o o p p e e r r S S A A S S - - 1 1 P P l l u u s s : : rimuovere il coperchio), rimovere gli elettrodi dalla superficie del gel.
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Página 33: Interpretazione Dei Risultati
SAS-1 IMMUNOFISSAZIONE 17. Selezionare il programma IFE. a) SAS-2 (Colorazione Automatica) P P a a s s s s a a g g g g i i o o S S o o l l u u z z i i o o n n e e T T e e m m p p o o ( ( m m m m : : s s s s ) ) N N u u m m e e r r o o d d i i P P o o r r t t a a T T e e m m p p ( ( °... - Página 34 La pubblicazione "Immunofixation for the Identification of Monoclonal Gammopathies" è disponibile dal Helena BioSciences, su richiesta. IMMUNOFISSAZIONE URINE: Tipo di Proteinuria Bande osservate nel gel Proteine presenti Urina normale Piccola banda di albumina albumina Glomerulare Albumina, alfa-1 albumina, alfa1 antitripsina...
- Página 35 Una serie di campioni sono stati testati e comparati con altri kit disponibili in commercio - entrambi i kits hanno mostrato risultati equivalenti. Il controllo del siero Kemtrol anomalo Helena Biosciences (Cod. 7025) può essere diluito in un rapporto di 1 a 100 e utilizzato come controllo positivo per IFE per urina.
- Página 36 Johnson, A.M., ‘Genetic Typing of Alpha(1)-Antitrypsin in Immunofixation Electrophoresis. Identification of Subtypes of Pi M.’, J. Lab. Clin. Med., 1976; 87 : 152-163. 10. Cawley, L.P., Minard, B.J, Tourtellotte, W.W., Ma, B.I. and Chelle, C., ‘Immunofixation Electrophoretic Technique Applied to Identification of Proteins in Serum and Cerebrospinal Fluid’, Clin.
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Página 37: Sas-1 Inmunofijación
SAS-1 INMUNOFIJACIÓN USO PREVISTO El kit IFE de SAS-1 tiene como objeto la separación e identificación de gammapatías monoclonales por electroforesis con gel de agarosa. La inmunofijación (IFE) es un procedimiento en dos etapas aplicando electroforesis en agarosa de alta resolución en la primera etapa e inmunoprecipitación en la segunda. - Página 38 COMPOSICION 1. Gel de IFE SAS-1. Contiene agarosa en un tampón de Tris-Barbital, con Tiomersal y acída de sodio como conservantes. El gel viene envasado listo para usar. 2. Colorante violeta ácido concentrado. Contiene colorante violeta ácido concentrado. Diluir el contenido del frasco en 700ml de agua destilada.
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Página 39: Accesorios Necesarios, No Suministrados
SAS-1 INMUNOFIJACIÓN 4. Solución de lavado. El solución de lavado debe guardarse a una temperatura entre 15...30°C y es estable hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta. La solución de lavado diluida es estable durante 6 meses a una temperatura entre 15...30°C. -
Página 40: Recogida Y Preparacion De Muestras
RECOGIDA Y PREPARACION DE MUESTRAS La muestra consistirá en suero recién obtenido. Las muestras se pueden guardar hasta 4 días a una temperatura entre 15...30°C, hasta 2 semanas entre 2...6°C, o 6 meses a -20°C Las muestras de orina deben aplicarse puras, sin mezclar. Las muestras de suero se diluirán de acuerdo con la tabla siguiente, utilizando el diluente de muestras: κ... - Página 41 SAS-1 INMUNOFIJACIÓN i i i i i i ) ) S S o o l l o o p p a a r r a a S S A A S S - - 3 3 : : Tiempo (mm:ss.) Temperatura (° ° C) Voltaje Otros Paso Cargar muestra 00:30...
- Página 42 15. S S o o l l o o p p a a r r a a S S A A S S - - 1 1 : : Retirar los secantes. NOTA: Inmediatamente después de su uso, limpiar la plantilla de antisuero con un detergente biocida suave.
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Página 43: Interpretacion De Resultados
También se puede observar una banda dentro de un fondo policlonal cuando también se da una fuerte presencia de inmunoglobulina policlonal. Bajo pedido, Helena Biosciences puede suministrar la publicación 'Immunofixation for the Identification of Monoclonal Gammopathies'. Inmunofijación de la orina:... -
Página 44: Caracteristicas Funcionales
Se probo una serie de muestras, y al compararla con otro kit comercial disponible, ambos presentaron resultados equivalentes. El control de suero anormal Kemtrol de Helena Biosciences (N.º Cat. 7025) puede diluirse en una proporción 1 en 100 y usarse como control positivo para el IFE de Orina. - Página 45 SAS-1 INMUNOFIJACIÓN BIBIOGRAFIA Fauchier, P. and Catalan, F. ‘Interpretive Guide to Clinical Electrophoresis’ Alfred Fournier Institute, Paris, France, 1988. Killingsworth, L.M., Cooney, S.K. and Tyllia, M.M. ‘Finding Clues to Disease in Urine’ Diagnostic Medicine, 1980 ; May/June : 69-75. Umbreit, A. and Wiedemann, G. ‘Determination of Urinary Protein Fractions. A Comparison With Different Electrophoretic Methods and Quantitatively Determined Protein Concentrations’...
- Página 48 BioSciences Europe www.helena-biosciences.com Helena Biosciences Europe Queensway South Team Valley Trading Estate Gateshead Tyne and Wear NE11 0SD tel: +44 (0) 191 482 8440 fax: +44 (0) 191 482 8442 email: [email protected] HL-2-1280P 2007/01 (6)