Tabla de contenido
Análisis de curvas de disociación de alta resolución
estándar normalizada y en
normalizado a la muestra metilada al 50%.
11.5
Directrices para un análisis HRM exitoso
El éxito del análisis HRM depende en gran medida de
la secuencia concreta que se desee investigar. Los
resultados pueden verse afectados por determinados
motivos de secuencias, como p. ej. bucles en horquilla
u otras estructuras secundarias, regiones localizadas
con un contenido en GC inusualmente elevado o
bajo o secuencias repetidas. Además, mediante el
uso de los kits estandarizados y de los protocolos
optimizados de QIAGEN se pueden superar muchos
de los problemas indicados. A continuación se indican
algunas normas que pueden ayudarle a asegurar el
éxito del análisis.
Analice fragmentos de ADN pequeños
Analice fragmentos con un tamaño máximo de
aproximadamente 250 bp. Podrá analizar con éxito
productos mayores, pero normalmente estos
proporcionarán una resolución menor. Esto se debe,
por ejemplo, a que una variación de una única base
tendrá un mayor efecto sobre el comportamiento de
disociación de un amplicón de 100 bp que de uno de
500 bp.
Asegúrese de que la PCR solo contenga el
producto específico
Las muestras contaminadas con artefactos post-PCR,
como p. ej. dímeros de cebadores o productos no
específicos, pueden dificultar la interpretación de los
resultados HRM. Los kits de QIAGEN para el análisis
HRM aseguran una especificidad máxima sin
necesidad de una optimización.
11-8
B
Manual del usuario Rotor-Gene Q MDx 09/2018
un gráfico de diferencias
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