Illumina cBot Guía Del Sistema página 25

Guía del sistema cBot
1 Diluya la biblioteca o el conjunto de bibliotecas a la concentración adecuada.
Tipo de biblioteca
TruSeq DNA PCR-Free
Nextera DNA Flex
ADN TruSeq Nano
Exoma de captura rápida de
Nextera
ARN total monocatenario TruSeq
ARNm monocatenario TruSeq
2 [Opcional] Añada control PhiX no desnaturalizado de Illumina al 1 % a las bibliotecas no desnaturalizadas:
Tipo de biblioteca
TruSeq DNA PCR-Free
Nextera DNA Flex
ADN TruSeq Nano
Exoma de captura rápida de
Nextera
ARN total monocatenario TruSeq
ARNm monocatenario TruSeq
3 Etiquete cada nueva gradilla de ocho tubos del 1 al 8.
4 Desnaturalice la biblioteca en la gradilla de ocho tubos del modo siguiente.
a Añada 5 µl de biblioteca no desnaturalizada al fondo de cada pocillo.
b Añada 5 µl de NaOH 0,1 N recién diluido. Realice un pipeteo suave para mezclarlo.
c Incube a temperatura ambiente durante 8 minutos.
d Añada 5 µl de Tris-HCl 200 mM pH 8.0. Realice un pipeteo suave para mezclarlo.
5 Reserve en hielo 30 minutos como máximo, hasta que esté preparado para añadir la mezcla maestra
ExAmp.
Preparación de la placa de reactivos de cBot
1 Invierta para mezclar.
2 Agite en un vórtice para eliminar cualquier burbuja de aire atrapada.
3 Golpee sobre una superficie dura para recoger cualquier gota de reactivo. De forma alternativa, pulse en
centrifugar.
4 Reserve en hielo.
Preparación de la reacción de ExAmp
Prepare la mezcla maestra de la reacción de ExAmp inmediatamente antes de su uso.
1 Invierta EPX1 y EPX2 para mezclarlos.
2 Centrifugue brevemente EPX1, EPX2 y EPX3.
3 Prepare la mezcla maestra ExAmp en el tubo de 1,5 ml del modo siguiente.
N.º de documento 15006165 v05 ESP
Para uso exclusivo en investigación.
Prohibido su uso en procedimientos de diagnóstico.
Dilución
Diluir a 1-2 nM en RSB.
Diluir a 2-3 nM en RSB.
Diluir a 2-3 nM en RSB.
Adición
Añadir 5 µl de PhiX de 100-200 pM a 45 µl de biblioteca de 1-2 nM.
Diluir a 2-3 nM en RSB.
Añadir 5 µl de PhiX de 200-300 pM a 45 µl de biblioteca de 2-3 nM.
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