Illumina cBot 2 Guía Del Sistema página 23

Guía del sistema cBot 2
Preparación de una dilución nueva de NaOH
1 Combine los volúmenes siguientes en un tubo de microcentrífuga:
Agua de laboratorio (900 µl)
u
Preparado de NaOH 1 N (100 µl)
u
Estos volúmenes producen 1 ml de N NaOH 0,1.
2 Invierta para mezclar.
Desnaturalización de bibliotecas y adición de control PhiX opcional
La concentración de carga de bibliotecas depende de las bibliotecas que se vayan a secuenciar. Deberán
seguirse estas instrucciones en el caso de bibliotecas compatibles con Illumina y se deberá prever el tamaño
de fragmento habitual para el tipo de biblioteca asociada. Asegúrese de diluir en una concentración
adecuada para el tipo de biblioteca.
Una concentración de carga de ADN demasiado alta provoca un % PF reducido.
u
Una concentración de carga de ADN demasiado baja provoca un % PF reducido, así como un elevado
u
porcentaje de duplicados que afecta de forma negativa a la profundidad de cobertura.
1 Diluya la biblioteca o el conjunto de bibliotecas a la concentración adecuada.
Tipo de biblioteca
ADN TruSeq sin PCR
Kit flexible de ADN Nextera
ADN TruSeq Nano
Exoma de captura rápida de
Nextera
ARN total monocatenario TruSeq
ARNm monocatenario TruSeq
2 [Opcional] Añada control PhiX no desnaturalizado de Illumina al 1 % a las bibliotecas no desnaturalizadas:
Tipo de biblioteca
ADN TruSeq sin PCR
Kit flexible de ADN Nextera
ADN TruSeq Nano
Exoma de captura rápida de
Nextera
ARN total monocatenario TruSeq
ARNm monocatenario TruSeq
3 Número de tubos de una gradilla de ocho tubos:
Para la generación de grupos con seguimiento de muestras: Desde el extremo con la clave, etiquete
u
los tubos de 8 a 1.
Para la generación de grupos sin seguimiento de muestras: Etiquete los tubos de 1 a 8.
u
N.º de documento 15065681 v05 ESP N.º de material 20015507
Para uso exclusivo en investigación.
Prohibido su uso en procedimientos de diagnóstico.
Dilución
Diluir con 1–2 nM en RSB.
Diluir con 2–3 nM en RSB.
Diluir con 2–3 nM en RSB.
Adición
Añadir 5 µl de PhiX de 100–200 pM a 45 µl de biblioteca de 1–2 nM.
Diluir con 2–3 nM en RSB.
Añadir 5 µl de PhiX de 200–300 pM a 45 µl de biblioteca de 2–3 nM.
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