Tabla de contenido
1. Agite suavemente el frasco con microesferas de sefarosa
2. Mezcle la cantidad total de microesferas de sefarosa
3. Agregue la solución preparada en el paso 2 a una placa
4. Añada 5–20 µl de un producto de la PCR biotinilado
5. Selle la placa PCR (o las tiras) mediante tapas de tiras.
6. Agite la placa PCR (o las tiras) de forma continua
Manual de usuario del PyroMark Q24 MDx 01/2016
recubiertas con estreptavidina de un lado a otro hasta
obtener una solución homogénea.
recubiertas con estreptavidina (2 µl por muestra) y
tampón de unión (40 µl por muestra) en un tubo. Añada
agua ultrapura hasta obtener un volumen total de 80 µl
por pocillo, incluyendo el producto de la PCR que se
debía añadir en el paso 4.
La cantidad de agua depende de la cantidad del
producto de la PCR utilizado. Por ejemplo: si se utilizan
15 µl del producto de la PCR, 2 µl de microesferas y 40
µl de tampón de unión, se deben añadir 23 µl de agua
ultrapura.
o a tiras PCR de 24 pocillos.
bien optimizado a cada pocillo de la placa PCR (o de las
tiras) según la configuración de la placa (véase la
sección 5.2.3).
Nota: Si utiliza el kit PyroMark PCR, 5–10 µl del
producto de la PCR proporcionarán en la mayoría de los
casos resultados de pirosecuenciación satisfactorios. Este
volumen se debe ajustar para obtener alturas de pico
individuales de al menos 40 RLU en el pirograma.
Nota: El volumen total por pocillos debe ser de 80 µl.
Asegúrese de que no puedan producirse fugas entre los
pocillos.
durante al menos 5–10 min mediante un mezclador
(1400 rpm).
Nota: Las microesferas de sefarosa sedimentan
rápidamente y la captura de las microesferas se debe
realizar inmediatamente tras finalizar la agitación.
Nota: Durante la inmovilización, prepare la estación de
vacío para la preparación de la muestra (pasos 1–8 en
la sección 5.3.4).
Procedimientos operativos
5-13
Tabla de contenido
