7. Selezionare il programma IFE, successivamente applicare i campioni e procedure con
l'elettroforesi.
8. Alla termine dell'elettroforesi, rimuova gli elettrodi e rimuovere entrambi I ponti di gel utilizzando
l'apposito "Rimuovi ponti di gel". Posizionare la maschera per l'applicazione degli antisieri sulla
superficie del gel.
dovrebbero essere allineati centralmente sopra alla serigrafia del gel, nei quali sono stati applicati i
campioni.
9. Applicare 2 gocce (oppure 60 microlitri) di Fissante Proteico (per IFE siero) oppure di antisiero
totale (per IFE urine) all'interno del foro della linea SP e 2 gocce (oppure 60 microlitri)
dell'appropriato antisero all'interno dei fori delle linee delle immunoglobuline. Assicurarsi che il
fissante e gli antisieri abbiano riempito completamente i canali.
10. Incubare il gel.
11. Al termine del periodo di incubazione, collocare 1 pettinino di carta nei fori superiori della
maschera per l'applicazione degli antisieri. Lasciare assorbire per 2 minuti per eliminare l'eccesso
di antisiero. Quindi rimuovere il pettinino di carta e la maschera di applicazione degli antisieri dalla
superficie del gel.
12. Collocare un blotter D (con il lato liscio rivolto verso il basso) sulla superficie del gel. Lasciare il
blotter sulla superficie del gel. Rimettere a posto la maschera per l'applicazione degli antisieri,
avvolgendola con della carta.
13. Rimuovere il blotter D e asciugare il gel. NOTA: Immediatamente dopo l'uso, lavare la maschera
per l'applicazione degli antisieri con un blando disinfettante. Se possibile pulire il fondo della
mascherina con uno spazzolino oppure con un piccolo pennello. Non lasciare asciugare gli antisieri
sulla mascherina. L'accumulo degli antisieri sulla superficie della mascherina puó dare origine alla
formazione di bolle d'aria durante la fase di applicazione degli antisieri. Asciugare completamente
la maschera per l'applicazione degli antisieri. L'acqua lasciata nei canali potrebbe impedire una
corretta applicazione degli antisieri.
circolazione dell'aria consentendone così l'asciugatura.
14. Fissarlo il gel al supporto della camera di colorazione.
15. Selezionare il programma IFE, opo la preparazione si procederà con la lavata, colorare, decolorare
ed asciugatura del gel.
16. l termine del ciclo di colorazione, rimuovere il gel dalla camera. Il gel è ora pronto per essere
esaminato.
INTERPRETAZIONE DEI RISULTATI
La maggior parte delle proteine monoclonali migra nella zona catodica (gamma) del tracciato proteico,
in quanto anomale possono migrare ovunque nel tracciato.
Nel tracciato immunofissato, la banda monoclonale occuper à la stessa posizione di migrazione e avrà
la stessa conformazione della corrispondente banda monoclonale del tracciato di riferimento.
La proteina patologica viene fissata dall'antisiero corrispondente che viene utilizzato.
Dove sono presenti basse concentrazioni di proteine patologiche, le bande possono apparire senza le
normali immunoglobuline policlonali.
La pubblicazione 'Immunofixation for the Identification of Monoclonal Gammopathies' è disponibile dal
Helena BioSciences, su richiesta.
NOTA: I canali fresati della maschera per l'applicazione degli antisieri
Conservare la maschera capovolta, per aumentare la
SAS-3 IMMUNOFISSAZIONE
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