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R R A A C C C C O O L L T T A A D D E E I I C C A A M M P P I I O O N N I I E E P P R R E E P P A A R R A A Z Z I I O O N N E E
Il campione di sangue raccolto con EDTA o il sangue anticoagulato con eparina rappresentano il
campione da preferire. I campioni possono essere refrigerati a 2...6°C fino a 1 settimana. Per risultati
ottimali, è opportuno utilizzare gli eritrociti lavati con la soluzione fisiologica per la preparazione dei
lisati. Questo procedimento elimina le eventuali interferenze da proteine plasmatiche.
a) Miscelare 200µL di sangue intero mescolato bene con 1000µL di soluzione fisiologica.
b) Centrifugare per sedimentare gli eritrociti.
c) Rimuovere 1000µL di sopranantante e gettarlo via.
d) Aggiungere altri 1000µL di soluzione fisiologica e mescolare bene.
e) Ripetere due volte i punti b-d.
f)
In seguito alla centrifugazione finale, rimuovere 1000µL di sopranatante e trattare il campione
rimanente come sangue intero, o rimuovere tutto il sopranatante e trattare il campione rimanente
come cellule lavate ravvicinate.
Diluire ciascun campione/controllo del paziente, con agente lisante per emoglobina, in una
concentrazione di emoglobina di 0,5-1,5 g/dL.
P P R R O O C C E E D D U U R R A A
1. Rimuovere il gel dalla confezione e collocarlo su una bibula. Asciugare la superficie del gel con un
blotter C e poi eliminarlo.
2. Applicare la mascherina di semina allineandola con i punti laterali del gel. Porre un blotter A sopra
alla mascherina ed effettuare una leggera pressione con le dita sulle fessure per verificare il
corretto contatto. Rimuovere il blotter e conservarlo per il passaggio 5.
3. Applicare 3µl di campione in ogni fessura di semina e lasciare assorbire per 5 minuti.
4. Durante l'assorbimento dei campioni, collocare 30ml di tampone in ogni compartimento interno
della camera di migrazione.
5. Dopo l'assorbimento del campione, asciugare la mascherina con il blotter A, conservato dal
passaggio 2, quindi eliminare mascherina e blotter.
6. Posizionare il gel nella camera, con il lato dell'agarosio rivolto verso il basso, allineando i lati positivi
(+) e negativi (-) alle posizioni corrispondenti nella camera.
7. Sottoporre il gel ad elettroforesi a 50 volt per 30 minuti
8. Al termine dell'elettroforesi, immergere il gel in soluzione fissativa / decolorante per 5 minuti.
9. Immergere il gel nella soluzione colorante per 15 minuti.
10. Sciacquare brevemente il gel nella soluzione fissativa / decolorante per rimuovere il colorante in
eccesso, e asciugare in un forno di essiccazione ad aria forzata a 60...70°C.
11. Decolorare il gel in 2 bagni di soluzione fissativa / decolorante per 2 minuti ciascuno, fino ad
ottenere un fondo chiaro.
12. Sciacquare velocemente il gel con acqua distillata e asciugare.
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SAS-MX HB-10 ACIDA
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