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6.4.2
Controles del microchip
El diseño del microchip de ADN PapilloCheck
en el microchip. Varios sistemas de control supervisan todos los pasos críticos del ensayo y el
procesamiento del microchip, lo que incluye la calidad de la muestra y la extracción de ADN (control
de muestra), la calidad de la reacción PCR (control de PCR), la eficiencia de la hibridación (control
de hibridación), así como la homogeneidad de las marcas y la calidad de impresión (control de
orientación y control de impresión). Además de la presencia o ausencia de los tipos de VPH, el
software CheckReport™ muestra de forma automática tanto los valores correspondientes de los
controles como los tipos de VPH detectados en un informe detallado. Para la lectura de los diferentes
controles, se utilizan ambas longitudes de onda de excitación de CheckScanner™. Para el control
del rendimiento del ensayo (control de muestra y de PCR), se usa el canal rojo (longitud de onda de
excitación de 635 nm), mientras que la calidad de la hibridación y el microchip (control de hibridación,
orientación e impresión) se evalúa en el canal verde (longitud de onda de excitación de 532 nm).
Control de muestra
PapilloCheck
controla la calidad de la muestra y/o la extracción de ADN mediante la amplificación
®
de un fragmento de una copia del gen humano ADAT1 (adenosina desaminasa específica del ARNt
humano1). Si hay presente ADN humano en una cantidad adecuada en el ADN extraído de la muestra
cervicouterina, se genera una señal fluorescente en las marcas de control de muestra.
En caso de que la amplificación del ADAT1 sea insuficiente o no se produzca, el software
CheckReport™ indicará el error en el control de muestras (Failed). Esto tendrá dos consecuencias
diferentes, dependiendo de la señal de las marcas de patógenos específicas. Si la muestra da
resultados positivos para VPH, el análisis seguirá siendo válido. En este caso, el control de muestra
que ha generado el error será resultado directo de la competición entre el ADN incluido y un exceso
de ADN objetivo durante la PCR. Si, por otra parte, el resultado de la muestra es negativo para VPH,
el software CheckReport™ indicará el error en el análisis (Failed) debido a una toma de muestras
deficiente (cantidad insuficiente de células en la muestra) o una extracción de ADN ineficaz. En este
caso, se recomienda repetir el análisis comenzando por la extracción de ADN o, si es necesario,
tomar una nueva muestra (consulte el capítulo 9).
Control de PCR
PapilloCheck
también controla la calidad de la PCR. La amplificación de una plantilla de control
®
interna presente en el PapilloCheck
de PCR del microchip PapilloCheck
automáticamente en el software CheckReport™. Si el rendimiento de la PCR es inferior a un umbral
predefinido, el software CheckReport™ indicará el error en el control de PCR (Failed) y se deberá
repetir el análisis (consulte el capítulo 9).
Si la cantidad de ADN de VPH en la muestra es muy elevada, la señal fluorescente de las marcas
de control de PCR puede ser débil o incluso no aparecer, como consecuencia de la competición
durante la reacción PCR. En este caso, la señal fluorescente de al menos una sonda especifica de
VPH debe superar un umbral predefinido para que el ensayo se considere válido.
Control de hibridación
PapilloCheck
controla la eficiencia de la hibridación mediante una sonda marcada con fluorescencia
®
en el tampón de hibridación PapilloCheck
el microchip PapilloCheck
fluorescentes en cada marca de la matriz. Los resultados de cinco marcas de control de hibridación
en el microchip PapilloCheck
Greiner Bio-One GmbH
Maybachstr. 2
72636 Frickenhausen
Alemania
Fabricado en Austria
Manual de instrucciones de PapilloCheck
Revisión: BQ-708-00 / Octubre de 2017
PCR MasterMix genera una señal en las marcas de control
®
. Además, la calidad de la reacción de amplificación se evalúa
®
, que hibrida según secuencias de ADN específicas en
®
. Una hibridación con la eficiencia adecuada da como resultado señales
®
también se evalúan mediante el software CheckReport™.
®
465 060-02
505 060
PELIGRO
48
y PapilloCheck
high-risk
®
®
incorpora unos completos controles integrados
®
8 °C
16
4 °C
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