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PapilloCheck
Manual de instrucciones
Equipo de diagnóstico para la genotipificación de los tipos del virus del papiloma humano
6, 11, 16, 18, 31, 33, 35, 39, 40, 42, 43, 44/55, 45, 51, 52, 53, 56, 58, 59, 66, 68, 70, 73, 82 en
muestras cervicouterinas
REF 465 060
Para uso diagnóstico in vitro
únicamente por parte de personal de laboratorio profesional
Greiner Bio-One GmbH
Maybachstr. 2 • 72636 Frickenhausen • Alemania
Teléfono: +49 (0) 7022 948-0 • Fax +49 (0) 7022 948-514
[email protected] • www.gbo.com/bioscience
®
H P V D N A - C h i p
Revisión: BQ-013-07
Agosto de 2011
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Resumen de contenidos para Greiner Bio-One PapilloCheck
- Página 1 Para uso diagnóstico in vitro Agosto de 2011 únicamente por parte de personal de laboratorio profesional Greiner Bio-One GmbH Maybachstr. 2 • 72636 Frickenhausen • Alemania Teléfono: +49 (0) 7022 948-0 • Fax +49 (0) 7022 948-514 [email protected] • www.gbo.com/bioscience...
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Página 2: Glosario De Símbolos
<n> test edici saklayınız tarihi: talimatı tıbbi tanı için yeter- Greiner Bio-One GmbH okuyun ürünü lidir Maybachstr. 2 • 72636 Frickenhausen • Alemania Teléfono: +49 (0) 7022 948-0 • Fax +49 (0) 7022 948-514 [email protected] • www.gbo.com/bioscience PapilloCheck - Manual de instrucciones ®... -
Página 3: Tabla De Contenido
Distribución del microchip PapilloCheck ................13 ® 6.4.2 Controles del microchip ....................... 14 7. INSTRUCCIONES PARA LA SECUENCIA DE TRABAJO DE PAPILLOCHECk ..® 7.1 Instrucciones generales ........................ 15 7.2 Separación de las salas ......................... 15 7.3 Advertencias y precauciones ....................... 16 PapilloCheck ®... - Página 4 9. SOLUCIÓN DE PROBLEMAS ..................10. ASISTENCIA TÉCNICA ....................11. CARACTERÍSTICAS DE RENDIMIENTO DE PAPILLOCHECk ......® H P V D N A - C h i p 11.1 CARACTERÍSTICAS DE RENDIMIENTO DE PapilloCheck ............34 ® 11.1.1 Sensibilidad analítica ......................34 11.1.2 Especificidad analítica - Tipos de VPH ................
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Página 5: Contenido Del Equipo
PCR MasterMix 5 x 300 µl PCR MasterMix H P V D N A - C h i p 1 caja para portaobjetos PapilloCheck ® Caja para portaobjetos, 5 x 12 matrices 5 x 12 matrices con 5 microchips PapilloCheck ®3... -
Página 6: Consumibles, Equipo Y Hardware Necesarios
2. CONSUMIBLES, EQUIPO Y HARDWARE NECESARIOS Se recomienda el uso de PapilloCheck en combinación con los consumibles, el equipo y el ® hardware enumerados únicamente por parte de personal profesional. N.º de catálogo de Consumibles Cantidad H P V D N A - C h i p... - Página 7 • PC (consulte los requisitos del sistema en el Manual de instrucciones de CheckScanner y el software CheckReport Equipo de diagnóstico para la genotipificación de los tipos del virus del papiloma humano Para realizar el procedimiento de lavado de PapilloCheck , se necesitan tres recipientes de lavado oCheck ® ®...
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Página 8: Transporte Y Almacenamiento
No obstante, ® es preciso almacenar el equipo inmediatamente después de recibirlo a 4-8 °C y protegerlo de la luz. Si se almacenan correctamente, el equipo de ensayo PapilloCheck y sus componentes se pueden ®... -
Página 9: Eliminación De Residuos
Después de lavar y secar el microchip PapilloCheck , se pueden desechar las soluciones de lavado ® I, II y III sin precauciones especiales. Deseche el microchip PapilloCheck usado, los componentes ® del equipo sin utilizar y la mezcla de hibridación no utilizada con los desechos químicos del laboratorio. -
Página 10: Introducción
PapilloCheck permite identificar los 18 tipos de alto riesgo y los 6 tipos de bajo riesgo ® virus del papiloma humano (VPH) (Tabla 1). Tabla 1: Tipos de VPH detectables con PapilloCheck ® VPH 16 VPH 45 VPH 59 VPH 6... -
Página 11: Principio Del Ensayo
, se debe extraer ADN de una muestra de citología cervicouterina. ® La toma de muestras y la extracción de ADN no forman parte del equipo de ensayo PapilloCheck ® Greiner Bio-One también ofrece productos especializados para la toma de muestras (equipo de toma de muestras PapilloCheck ) y la extracción de ADN (equipo de extracción de ADN oCheck... - Página 12 3. Lavado y secado: se elimina el ADN sin unir en los pasos de lavado subsiguientes. Greiner Bio-One GmbH 4. Escaneo y análisis: se escanea, analiza y evalúa el microchip PapilloCheck utilizando CheckScanner y el software ®...
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Página 13: Diseño Del Microchip Papillocheck
28 sondas diferentes y tiene un reborde elevado. ® H P V D N A - C h i p Cada sonda se marca en cinco réplicas. La distribución de la micromatriz PapilloCheck se ilustra ® en la figura 2 y los controles del microchip se explican con más detalle en el capítulo 6.4.2. -
Página 14: Controles Del Microchip
Para uso diagnóstico in vitro únicamente por parte de personal de laboratorio profesional Control de orientación y de impresión Las marcas de control de orientación del microchip PapilloCheck generan señales fluorescentes ® con independencia de la eficiencia del proceso de hibridación. Estas marcas se usan en el software CheckReport como puntos de guía para la búsqueda de marcas correctas, que es un requisito... -
Página 15: Instrucciones Para La Secuencia De Trabajo De Papillocheck
Greiner Bio-One GmbH Maybachstr. 2 • 72636 Frickenhausen • Alemania Teléfono: +49 (0) 7022 948-0 • Fax +49 (0) 7022 948-514 [email protected] •... -
Página 16: Advertencias Y Precauciones
• Cuando reciba el equipo, compruebe que los componentes no estén dañados. Si uno de los componentes estuviera dañado (por ejemplo, frascos de tampón), póngase en contacto con su distribuidor local de Greiner Bio-One. No utilice los componentes dañados del equipo, ya que podría obtener unos resultados deficientes. -
Página 17: Seguridad En El Trabajo
REF 465 060 Para uso diagnóstico in vitro únicamente por parte de personal de laboratorio profesional Greiner Bio-One GmbH Maybachstr. 2 • 72636 Frickenhausen • Alemania Teléfono: +49 (0) 7022 948-0 • Fax +49 (0) 7022 948-514 [email protected] • www.gbo.com/bioscience... -
Página 18: Procedimiento De Papillocheck
• STM (Qiagen, Hilden, Alemania) Para obtener más información sobre los sistemas de extracción de ADN o los medios de transporte adecuados, póngase en contacto con el distribuidor local de Greiner Bio-One o visite el sitio web de Greiner Bio-One: www.gbo.com/bioscience/biochips_download... - Página 19 Capítulo 8.1.2 Extracción de ADN Capítulo 8.2 PCR Capítulo 8.3.2 Hibridación Capítulo 8.3.3 Lavado y secado Capítulo 8.4 Escaneo y evaluación Figura 4: Resumen de los diferentes pasos de trabajo de PapilloCheck ® PapilloCheck - Manual de instrucciones ® Revisión: BQ-013-07 / Agosto de 2011...
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Página 20: Extracción De Adn
ADN oCheck ® ® también suministrado por Greiner Bio-One (consulte la información sobre pedidos en el capítulo 2). Siga las instrucciones de uso detenidamente cuando utilice el equipo de extracción de ADN oCheck ®... -
Página 21: Reacción En Cadena De La Polimerasa (Pcr)
Es absolutamente necesario usar uno de los termocicladores mencionados antes para lograr el rendimiento establecido. El programa del termociclador de la PCR PapilloCheck se resume en la tabla 2. ® Tabla 2: Programa del termociclador para la PCR PapilloCheck ® Tiempo Temp. °C N.º de ciclos 20 min 37 °C... -
Página 22: Tratamiento De Uracil-N-Glucosilasa (Ung)
Esta cantidad es suficiente para eliminar la contaminación cruzada de PCR. Tenga cuidado de no usar una solución de UNG con mayor concentración, ya que esto podría tener un efecto negativo sobre el rendimiento de la PCR, lo que reduciría la sensibilidad de PapilloCheck ®... -
Página 23: Muestras Cervicouterinas 8.2.3 Preparación De La Reacción Pcr
13 reacciones de amplificación si se van a analizar 12 muestras (consulte la tabla 3). Utilice siempre una ampolla de MasterMix para las reacciones de un microchip. Se recomienda incluir un control negativo para cada lote de PapilloCheck PCR MasterMix preparado. ®... - Página 24 Tabla 3: Preparación de la reacción PCR PapilloCheck ® 1 reacción 13 reacciones 26 reacciones 39 reacciones 52 reacciones (1 microchip) (2 microchips) (3 microchips) (4 microchips) PapilloCheck ® 19,8 µl 257,4 µl 514,8 µl 772,2 µl 1029,6 µl PCR MasterMix Polimerasa HotStarTaq ®...
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Página 25: Hibridación Y Lavado
(20-25 °C) durante al menos 10 minutos. El soporte de portaobjetos magnético de la cámara de hibridación contiene un imán solamente en uno de sus extremos. Si se van a hibridar en paralelo menos de cuatro microchips PapilloCheck , tenga cuidado de ®... - Página 26 467,25 ml 623 ml No reutilice nunca las soluciones de lavado, ya que esto podría resultar en una acumulación del producto de PCR eliminado, lo que podría interferir con los resultados de PapilloCheck . Use soluciones de lavado ® nuevas para cada ensayo.
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Página 27: Para Uso Diagnóstico In Vitro 8.3.2 Hibridación
8.3.2 Hibridación La hibridación se debe realizar a temperatura ambiente (20-25 °C). Los pasos de trabajo del principio para hibridar los productos de PCR de la reacción PCR PapilloCheck en el microchip ® PapilloCheck se muestran en la figura 5. - Página 28 PCR con 5 µl del producto de la PCR. Mézclelo bien. ➠ Transfiera 25 µl de la mezcla de hibridación a cada pocillo del microchip PapilloCheck ® usando una multipipeta. ➠ Cierre la cámara de hibridación e incube...
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Página 29: Únicamente Por Parte De Personal De Laboratorio Profesional 8.3.3 Lavado Y Secado
8.3.3 Lavado y secado El equipo especializado suministrado por Greiner Bio-One permite realizar el lavado en paralelo de hasta cuatro microchips PapilloCheck (consulte el capítulo 2). El equipo adicional necesario para ® procesar los microchips PapilloCheck se compone de tres recipientes de lavado oCheck y un asa ®... - Página 30 3 minutos 1 minuto 500 g máx. velocidad Figura 6: Pasos de trabajo del proceso de lavado Diferentes pasos de lavado y procedimiento de secado antes del análisis del microchip PapilloCheck con CheckScanner ® y el software CheckReport PapilloCheck - Manual de instrucciones ®...
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Página 31: Escaneado Y Evaluación Del Microchip Papillocheck
PC coincida con la indicada en el equipo PapilloCheck ® usado actualmente. Si las versiones no coinciden, actualice el software CheckReport . La versión más reciente del software se puede descargar en el sitio web de Greiner Bio-One: www.gbo.com/bioscience/biochips_download PapilloCheck - Manual de instrucciones ®... -
Página 32: Solución De Problemas
® describe a continuación. No dude en ponerse en contacto con el distribuidor local de Greiner Bio- One si tiene alguna duda o experimenta dificultades al usar PapilloCheck ® H P V D N A - C h i p... -
Página 33: Asistencia Técnica
REF 465 060 Para uso diagnóstico in vitro Greiner Bio-One cuenta con un departamento de servicio técnico compuesto por científicos con únicamente por parte de personal de laboratorio profesional amplia experiencia tanto práctica como teórica en biología molecular y en los productos oCheck ®... -
Página 34: Características De Rendimiento De Papillocheck
H P V D N A - C h i p El límite de detección (LD) se estableció usando plásmidos de referencia para cada tipo de VPH detectable que contenga la región E1 que es el objetivo de PapilloCheck . Los LD se resumen en ®... -
Página 35: Especificidad Analítica - Tipos De Vph
VPH 13 no está presente en las muestras cervicouterinas. 11.1.3 Especificidad analítica - Organismos no VPH Los siguientes organismos no VPH se han analizado con PapilloCheck (5-10 ng de ADN genómico). ®... -
Página 36: Repetibilidad
. Se variaron ® los números de copias de los diferentes objetivos de VPH presentes en las muestras, así como el ADN humano de fondo (consulte la tabla 9). Cada muestra se analizó con PapilloCheck en cinco ® H P V D N A - C h i p réplicas independientes. -
Página 37: Reproducibilidad
11.3 Reproducibilidad La reproducibilidad del equipo de ensayo PapilloCheck se determinó usando 22 muestras clínicas ® (consulte la tabla 10) con concentraciones de VPH próximas al límite de detección. La determinación se realizó mediante el mismo método, con material de muestra idéntico, por diferente personal en diferentes laboratorios con instrumental diferente. -
Página 38: Solidez
11.4 Solidez Con el fin de evaluar la solidez del sistema de ensayo PapilloCheck , se consideraron variaciones ® de los siguientes parámetros: • Temperatura de hibridación H P V D N A - C h i p • Tiempo de hibridación •... -
Página 39: Rendimiento Clínico De Papillocheck
® Para determinar el rendimiento clínico del ensayo PapilloCheck en lo que respecta a especificidad ® y sensibilidad clínicas, se realizó un estudio comparativo con PapilloCheck y el ensayo GP5+/6+- ® PCR-EIA. Para este estudio, se analizaron muestras de 1.437 mujeres representativas con citologías normales (grupo de control) de más de 40 años de edad (mediana de edad, 49 años;... - Página 40 Con el fin de evaluar la prevalencia de los tipos de VPH detectados por PapilloCheck , se cribaron ® citologías cervicouterinas de 881 mujeres. Todas las muestras cervicouterinas se tomaron en medio de toma de muestras STM (Qiagen, Hilden, Alemania). El más común fue el VPH 16 con una tasa de detección del 19,4 %.
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Página 41: Protocolo Breve De Papillocheck
12. PROTOCOLO BREVE DE PAPILLOCHECk ® Sala 2 12.1 Sala 2: PCR - Preparación de la mezcla de reacción ➠ Diluya la uracil-N-glucosilasa 1:200 en agua grado PCR ➠ Mezcle la dilución de UNG con cuidado ➠ Prepare la mezcla de reacción para la cantidad necesaria de reacciones PCR reacción... -
Página 42: Sala 2: Pcr - Adición De Adn Mensajero / Reacción Pcr
37 °C 15 min 95 °C 30 s 95 °C 25 s 55 °C 45 s 72 °C 30 s 95 °C 45 s 72 °C Espera 10 °C PapilloCheck - Manual de instrucciones ® Revisión: BQ-013-07 / Agosto de 2011... -
Página 43: Sala 3: Hibridación - Preparación / Reacción De Hibridación
Mezcle los productos de la PCR y centrifúguelos brevemente ➠ Mezcle el tampón de hibridación y centrifúguelo brevemente ➠ Mezcle 30 µl de tampón de hibridación PapilloCheck con 5 µl de producto de ® ➠ Mézclelo bien y centrifúguelo brevemente ➠... -
Página 44: Sala 3: Lavado Y Secado / Escaneo Y Evaluación
María a 50 °C durante 60 segundos ➠ Lave el microchip o los microchips PapilloCheck en la solución de lavado III a ® temperatura ambiente durante 10 segundos ➠ Retire el líquido de la superficie del microchip PapilloCheck mediante ® centrifugado 1 minuto 3 minutos máx.