7 Solución de problemas
7.2 Solución de problemas de electrotransferencia
Problema
Patrones de bandas difusas
Problema
Patrones de bandas difusas
Unión ineficaz a la membrana
Problema
Parámetros químicos
56
Solución
Para geles nativos, aumente la carga neta de la
proteína cambiando a una solución buffer de
transferencia con un pH distinto. Un pH más bajo
(< 6–7) aumenta la carga positiva de las
proteínas; un pH más alto (> 6–7) aumenta su
carga negativa.
Solución
Realice la transferencia inmediatamente tras la
separación electroforética. Si necesita realizar el
equilibrado antes de la transferencia, acorte o
elimine el tiempo de equilibrado o equilibre el gel
en la sala fría.
Si la solución buffer de transferencia contiene
metanol (≥ 10 %), equilibre el gel durante 30 min
en solución buffer de transferencia para que
encoja antes de ensamblar la pila.
Nota:
Como el metanol encoge ligeramente el gel, las
moléculas grandes podrían migrar más
despacio.
Asegúrese de que el gel esté firme sobre la
membrana y que no se desplace con el contacto.
Compruebe que la superficie de unión preferible
de la membrana (si la hay) está en contacto con
el gel.
Solución
Fije o enlace transversalmente la molécula a la
membrana según requiera el tipo de membrana,
ácido nucleico o proteína.
Prepare solución buffer de transferencia de
proteínas sin SDS.
miniVE Instrucciones de funcionamiento 29281778 AB
