Tabla de contenido
Recetas de gel
Las recetas de gel Laemmli son para 30 ml de una solución única concentración (suficiente
para un 1,5-mm 18 × 16 cm de gel). Tabulados son ingredientes y volúmenes de los geles de
poros relativamente grandes (de 7,5 a 10% gama T), así como pequeñas geles de poro (12,5
a 15% intervalo T). Un gel de 4% de apilamiento es común. La receta gradiente lineal es de
100 ml de solución. El volumen total necesaria depende del número de fundición geles y el
espesor de gel; ajuste si es necesario. Todos los geles se reticulado con 2,6% de C.
Tabla 5. Laemmli en gel recetas
(por cada 30 ml de solución de gel de resolución, 5 ml de solución de gel de apilamiento)
La acrilamida stock (Solución #1)
1,5 M TrisCl, pH 8,8 (Solución #2) 7,5 ml
0,5 M TrisCl, pH 6,8 (Solución #3)
10% SDS (Solución #4)
H
O desionizada
2
10% APS (Solución #5)
TEMED
Volumen final
Para geles de gradiente lineal, utilice volúmenes iguales de bajo y alto% de soluciones%
de acrilamida. Menos de APS se añade a extender el tiempo de polimerización, y menos
aún se añade a la solución T% superior para permitir que se produzca la polimerización de
arriba hacia abajo. En nuestra experiencia con las concentraciones en el ejemplo gradiente
10-20% por debajo, diez emparedados de gel se puede verter en una máquina de colada
de gel múltiple a un caudal de 5-10 ml / min.
Tabla 6. Lineales recetas en gel de gradiente (por 100 ml de solución)
La acrilamida stock (Solución #1)
Sacarosa
1,5 M TrisCl, pH 8,8 (Solución #2)
10% SDS (Solución #4)
H
O desionizada
2
10% APS (Solución #5)
TEMED
La resolución de gel de
7,5%
10%
7,5 ml
10 ml
7,5 ml
0,3 ml
0,3 ml
14,6 ml
12,1 ml
150 µl
150 µl
10 µl
10 µl
30,0
30,0 ml
10% T
33,30 ml
25,00 ml
1,00 ml
a 100,00 ml
0,300 ml
0,036 ml
12,5%
12,5 ml
15 ml
7,5 ml
7,5 ml
0,3 ml
0,3 ml
9,6 ml
7,1 ml
150 µl
150 µl
10 µl
10 µl
30,0 ml
30,0 ml
—
gel apilamiento
15%
4%
0,67 ml
1,25 ml
0,05 ml
3,00 ml
25 µl
2,5 µl
5,0 ml
20% T
66,70 ml
15,00 g
25,00 ml
1,00 ml
a 100,00 ml
0,060 ml
0,036 ml
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