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El tampón RPE se suministra como concentrado. Antes de utilizarlo por
primera vez, añada 4 volúmenes de etanol (96-100%), tal como se indica
en la botella, para obtener una solución de trabajo.
Procedimiento
1. Añada 4 ml de etanol al 70% al lisado y mezcle agitando enérgicamente.
No centrifugue la mezcla.
Nota: pueden formarse precipitados visibles después de añadir el etanol.
Disuelva por completo los precipitados agitando enérgicamente y continúe
inmediatamente por el paso 2. Una disolución insuficiente de los
precipitados puede causar la contaminación del ADN y, en consecuencia,
la obtención de una muestra de ARN total impura.
2. Aplique la muestra, incluido cualquier precipitado que se haya formado,
sobre una columna RNeasy Midi situada en un tubo de centrífuga de 15 ml
(suministrado). Cierre el tubo con suavidad y centrifugue durante 5 minutos
a 4.000 × g. Deseche el flujo continuo.
Nota: el volumen de carga máximo es de 4 ml. Si el volumen es superior a
4,0 ml, cargue alícuotas sucesivamente en la columna RNeasy y centrifugue
de la forma descrita anteriormente. Deseche el flujo continuo después de
cada paso de centrifugación.
Reutilice el tubo de centrífuga en el paso 3.
3. Añada 4 ml de tampón RW1 a la columna RNeasy. Cierre el tubo de
centrífuga con suavidad y centrifugue durante 5 minutos a 4.000 × g para
lavar la columna. Deseche el flujo continuo.
Nota: el flujo continuo contiene tampón RLT o tampón RW1, por lo que no
es compatible con la lejía.
Reutilice el tubo de centrífuga en el paso 4.
4. Añada 2,5 ml de tampón RPE a la columna RNeasy. Cierre el tubo de
centrífuga con suavidad y centrifugue durante 2 minutos a 4.000 × g para
lavar la columna.
Nota: el tampón RPE se suministra como concentrado. Asegúrese de que se
ha añadido etanol al tampón RPE antes de utilizarlo.
Reutilice el tubo de centrífuga en el paso 5. No es preciso descartar el flujo
continuo.
Manual del kit ipsogen BCR-ABL1 Mbcr RGQ RT-PCR 12/2014
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