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Soluciones
Las soluciones (agua y otras soluciones) se deben tratar con DEPC al 0,1 %. El DEPC
reaccionará con las aminas primarias y no puede utilizarse directamente para tratar los
tampones Tris. El DEPC es altamente inestable en presencia de tampones Tris y se descompone
rápidamente en etanol y CO
con DEPC y, a continuación, disuelva el Tris para preparar el tampón adecuado.
El DEPC es un inhibidor potente, pero no absoluto, de las ARNasas. Se utiliza habitualmente
a una concentración del 0,1 % para inactivar las ARNasas en materiales de vidrio o de
plástico o para preparar soluciones y agua libres de ARNasas. El DEPC inactiva las ARNasas
por medio de una modificación covalente. Las cantidades mínimas de DECP modificarán los
residuos de purinas en el ARN por medio de una carbetoxilación. El ARN carbetoxilado se
convierte con una eficacia muy baja en sistemas libres de células. No obstante, su capacidad
de formar híbridos de ADN:ARN o ARN:ARN no se ve seriamente afectada, salvo que se
haya modificado una gran fracción de residuos de purinas. El DEPC residual siempre se debe
eliminar de las soluciones o de los recipientes en el autoclave o calentándolos a 100 °C
(± 3 °C) durante 15 minutos (± 1 minuto).
Añada 0,1 ml de DEPC a 100 ml de la solución que desee tratar y agítela enérgicamente
para disolver el DEPC o deje incubar la solución durante más de 12 horas a 37 °C ± 3 °C.
Esterilice en autoclave durante 15 minutos ± 1 minuto para eliminar cualquier resto de DEPC.
Puede ser recomendable analizar las fuentes de agua con respecto a la presencia de
ARNasas contaminantes, dado que muchas fuentes de agua destilada no presentan actividad
ARNasa.
Las ARNasas no se eliminan de los tampones del QIAamp DSP Virus Spin Kit
mediante un tratamiento con DEPC y, por consiguiente, estos no presentan ninguna
contaminación por DEPC.
Manual de instrucciones de uso de QIAamp DSP Virus Spin Kit
. Cuando prepare tampones Tris, en primer lugar trate el agua
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01/2021
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