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ARN transportador
El ARN transportador tiene dos funciones: en primer lugar, potencia la unión de los ácidos
nucleicos víricos a la membrana QIAamp, especialmente si en la muestra hay pocas moléculas
diana. En segundo lugar, la adición de grandes cantidades de ARN transportador reduce las
posibilidades de degradación del ARN vírico en el caso poco frecuente de que las moléculas
de ARNasa no se desnaturalicen por efecto de las sales caótropas y del detergente del Buffer
AL. Si no se añade ARN transportador al Buffer AL, la recuperación del ARN o del ADN vírico
puede ser menor.
La eficacia de los diferentes sistemas de amplificación varía en función de la cantidad total
de ácido nucleico presente en la reacción. Los eluidos de este kit contienen ácidos nucleicos
víricos y ARN transportador y las cantidades de ARN transportador superarán ampliamente
las cantidades de ácidos nucleicos víricos. Por consiguiente, la cantidad de eluido que se
debe añadir a las amplificaciones anterógradas debe calcularse en función de la cantidad
de ARN transportador añadido. Para obtener los niveles máximos de sensibilidad en las
reacciones de amplificación, puede ser necesario ajustar la cantidad de ARN transportador
añadido al Buffer AL.
Adición de controles internos
Si el protocolo QIAamp DSP Virus Spin se combina con un sistema de amplificación disponible
en el mercado, puede ser necesario introducir un control interno en el proceso de purificación.
El ARN o ADN de control interno se debe añadir junto con el ARN transportador al tampón
de lisis. Para optimizar la eficacia de purificación, las moléculas de control interno deben
tener una longitud superior a 200 nucleótidos, ya que las moléculas más pequeñas no se
recuperan eficazmente.
Consulte las instrucciones del fabricante para determinar la concentración óptima. Si no se
utiliza la concentración recomendada, la eficacia de amplificación puede ser menor.
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Manual de instrucciones de uso de QIAamp DSP Virus Spin Ki 01/2021
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