Modo De Espectro Lambda-Lambda; Barrido De Espectro - Waters ACQUITY UPLC Guia De Inicio Rapido

Modo de espectro lambda-lambda

Utilizando el modo de espectro lambda-lambda (λ-λ) del Detector FLR se
pueden determinar los máximos de fluorescencia para muestras problema y
utilizarlos para crear rápidamente métodos cromatográficos tradicionales
basados en el tiempo de retención. El modo de espectro λ-λ crea un espectro
que define la fluorescencia del analito a lo largo de los ejes de
excitación/emisión. En condiciones de flujo estático, el detector barre un
intervalo concreto de longitudes de onda de emisión a lo largo de un intervalo
también concreto de longitudes de onda de excitación. La fluorescencia se
representa así frente a los ejes de excitación/emisión y los resultados aparecen
en un archivo de datos.
Las longitudes de onda de excitación aparecen a lo largo del eje que
normalmente muestra el tiempo, y sus valores se reducen en un factor de 10
para que queden ajustados en el eje del tiempo. El eje continúa rotulado en
"minutos".
Requisito: hace falta una cubeta opcional para poder hacer un barrido en
modo lambda-lambda.

Barrido de espectro

El detector se puede usar como fluorímetro para adquirir espectros y
almacenarlos como un archivo. La principal diferencia entre este detector y un
espectrofotómetro de doble haz radica en que este detector utiliza solo una
cubeta de flujo, en vez de un par de cubetas de flujo simultáneas de muestra y
de referencia. El detector obtiene un espectro de fluorescencia realizando los
siguientes tipos de barrido en la cubeta de flujo:
• Barrido cero: define el espectro de absorbancia de la línea base de un
eluyente.
• Barrido de excitación de la muestra: resta el barrido cero, de modo que
los resultados mostrados son solo de los espectros de excitación de la
muestra.
• Barrido de emisión de la muestra: resta el barrido cero, de modo que los
resultados mostrados son solo de los espectros de emisión de la muestra.
Para obtener un espectro de excitación o emisión de una muestra, se debe
realizar un barrido cero seguido del barrido de muestras apropiado.
Normalmente el barrido cero se realiza con eluyente puro. Un barrido de
muestras se realiza habitualmente con el analito disuelto en el mismo
eluyente.
Barrido de espectro 1-17