Detección De Fluorescencia; Descripción General; Fuentes De Excitación; Tipos De Fuentes De Luz - Waters ACQUITY UPLC Guia De Inicio Rapido

Detección de fluorescencia
Descripción general
El detector de fluorescencia de barrido ilumina una muestra con una banda
estrecha de luz de gran intensidad. Después mide los niveles de fluorescencia
bajos emitidos por la muestra. La luz emitida se filtra, se amplifica y se
convierte en señales eléctricas que se pueden registrar y analizar.
Fuentes de excitación
La fuente de energía habitual usada en la detección de fluorescencia es una
lámpara que proporciona un espectro intenso y estable de luz en las regiones
ultravioleta (UV) y visible. La intensidad de la fluorescencia resultante está
directamente relacionada con la intensidad del espectro de excitación. Por este
motivo, los detectores de alta sensibilidad usan la fuente de excitación más
potente que existe.

Tipos de fuentes de luz

Entre las fuentes comunes de luz de excitación de banda ancha figuran las
lámparas de arco de xenón y de mercurio-xenón. Las lámparas de xenón son
las fuentes preferidas para los detectores de fluorescencia de uso general. La
lámpara de arco de mercurio-xenón del Detector FLR tiene la ventaja
adicional de concentrar su mayor intensidad en ciertas bandas de emisión.
Selección de la longitud de onda de excitación
La longitud de onda de excitación de elección debe ser filtrada de la fuente de
luz. Los detectores modernos suelen utilizar un monocromador para este fin.
Un monocromador es un dispositivo regulable que se usa para seleccionar
valores de longitudes de onda de un intervalo amplio del espectro. Un
monocromador de difracción utiliza una red de difracción que deja pasar solo
un pequeño intervalo, o ancho de banda, de longitudes de onda. Moviendo la
red de difracción se pueden seleccionar longitudes de onda dentro de un
determinado intervalo de longitudes de onda. Un monocromador de difracción
deja pasar además fracciones, u órdenes, de una longitud de onda
seleccionada. Por ejemplo, si el monocromador se configura para que deje
pasar la energía lumínica a 600 nm, deja pasar además energía a la longitud
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