Reacción En Cadena De La Polimerasa (Pcr); Preparación Del Termociclador - Greiner Bio-One PapilloCheck Manual De Instrucciones
Equipo de diagnóstico para la genotipificación de los tipos del virus del papiloma humano 6, 11, 16, 18, 31, 33, 35, 39, 40, 42, 43, 44/55, 45, 51, 52, 53, 56, 58, 59, 66, 68, 70, 73, 82 en muestras cervicouterinas
Tabla de contenido
8.2
Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)
La PCR es un método muy sensible que puede detectar cantidades extremadamente reducidas de
ADN. Se deben extremar las precauciones para evitar la contaminación de la reacción (consulte el
capítulo 7). Se requieren polimerasa HotStarTaq
con el equipo de ensayo PapilloCheck
!
El equipo de ensayo PapilloCheck
glucosilasa de Fermentas (consulte la información sobre pedidos en el capítulo 2). Es obligatorio usar estas
enzimas para lograr el rendimiento establecido.
8.2.1
Preparación del termociclador
El equipo de ensayo PapilloCheck
•
GeneAmp
PCR System 9700 (Applied Biosystems)
®
•
Veriti™ 96-Well Thermal Cycler (Applied Biosystems)
!
Es absolutamente necesario usar uno de los termocicladores mencionados antes para lograr el rendimiento
establecido.
El programa del termociclador de la PCR PapilloCheck
Tabla 2: Programa del termociclador para la PCR PapilloCheck
Tiempo
Temp. °C
20 min
37 °C
15 min
95 °C
30 s
95 °C
25 s
55 °C
45 s
72 °C
30 s
95 °C
45 s
72 °C
Espera
10 °C
Además, se deben establecer los siguientes parámetros de ejecución en cada termociclador. Para
obtener una descripción de cómo establecer estos parámetros, consulte el manual de instrucciones
del termociclador en cuestión.
GeneAmp
PCR System 9700 (Applied Biosystems)
®
Establezca el volumen de reacción en 26 µl, la velocidad de incremento en "9600" y use la temperatura
de tapa 103 °C.
Veriti™ 96-Well Thermal Cycler (Applied Biosystems)
Use la herramienta de conversión de método (Convert Method) del termociclador Veriti™ 96-Well
Thermal Cycler para introducir el programa de PCR PapilloCheck
Mode". Establezca el volumen de reacción en 26 µl y la temperatura de tapa, en 103 °C.
PapilloCheck
- Manual de instrucciones
®
Revisión: BQ-013-07 / Agosto de 2011
y uracil-N-glucosilasa, las cuales no se suministran
®
y deben adquirirse por separado (consulte el capítulo 2).
®
se ha validado con polimerasa HotStarTaq
®
se ha validado con los siguientes termocicladores:
®
se resume en la tabla 2.
®
®
N.º de ciclos
1
1
40
15
de Qiagen y uracil-N-
®
y elija el modo "9600 Emulation
®
21
Tabla de contenido
