Waters ACQUITY Premier Guía De Mantenimiento página 15

• Captura y filtración de la fluorescencia emitida
• Medición de la fluorescencia emitida
• Amplificación de la señal emitida
2.1.1 Descripción general de la detección de fluorescencia
El detector de fluorescencia de barrido ilumina la muestra con una banda estrecha de luz de alta
intensidad. Después, mide los niveles bajos de fluorescencia emitidos por la muestra. La luz
emitida se filtra, se amplifica, y se convierte en señales eléctricas que se pueden registrar y
analizar.
2.1.1.1 Fuentes de excitación
Una fuente de energía típica que se utiliza en la detección de fluorescencia es una lámpara que
proporciona un espectro de luz intenso y estable en las frecuencias visible y ultravioleta (UV). La
intensidad de la fluorescencia resultante está directamente relacionada con la intensidad del
espectro de excitación. De este modo, los detectores de alta sensibilidad usan la fuente de
excitación más potente disponible.
2.1.1.2 Tipos de fuentes de luz
Entre las fuentes de luz de excitación frecuentes de banda ancha se incluyen las lámparas de
arco de xenón y de mercurio-xenón (Hg/Xe). Las lámparas de xenón son las fuentes preferidas
para los detectores de fluorescencia de uso general. La lámpara de arco de Hg/Xe del detector
ACQUITY Premier FLR ofrece la ventaja adicional de tener una mayor intensidad en
determinadas bandas de emisión.
2.1.1.3 Selección de la longitud de onda de excitación
La longitud de onda de excitación óptima requiere algún tipo de filtración de la luz de la fuente.
Los detectores modernos suelen utilizar un monocromador con el mismo fin.
Un monocromador es un dispositivo regulable que se usa para seleccionar las longitudes de
onda en un amplio intervalo del espectro. Un monocromador de difracción usa una red de
difracción que deja pasar sólo un pequeño intervalo, o ancho de banda, de longitudes de onda.
Se pueden seleccionar las longitudes de onda, dentro de un determinado intervalo, moviendo la
red de difracción. Un monocromador de difracción deja pasar, además, fracciones u órdenes de
la longitud de onda seleccionada. Por ejemplo, si el monocromador se configura para que deje
pasar la energía de la luz a 600 nm, también dejará pasar la energía de la longitud de onda de
segundo orden de 300 nm. Un filtro de paso largo puede absorber la energía de orden superior
que produce un monocromador. A medida que el monocromador selecciona la excitación,
también puede seleccionar la emisión (energía irradiada). Los detectores con monocromadores
de excitación y emisión pueden hacer un barrido manteniendo constante la configuración de un
monocromador y cambiando la del otro. Este tipo de funcionamiento es necesario cuando se
evalúan mezclas o se analizan estructuras químicas.
10 de noviembre de 2021, 715006949ES Versión 01
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