2.1.2.2 Selección de la longitud de onda de emisión
Un monocromador selecciona una longitud de onda de emisión.
2.1.2.3 Tubo fotomultiplicador
El tubo fotomultiplicador (PMT) produce una corriente proporcional al flujo de fotones emitidos
por las moléculas en la celda de flujo.
2.1.2.4 Barrido
Los detectores equipados con monocromadores de excitación y emisión pueden barrer
fácilmente varias longitudes de onda de excitación o emisión. Cambiar la longitud de onda
implica cambiar también la configuración del monocromador. Durante un barrido, la configuración
de un monocromador se mantiene constante mientras el otro monocromador barre varias
longitudes de onda.
2.1.2.5 Funcionamiento multicanal
Los detectores equipados con monocromadores de excitación y emisión pueden cambiar la
longitud de onda de los valores de excitación y emisión. En funcionamiento multicanal, los dos
monocromadores se mueven rápidamente entre los pares de longitud de onda seleccionados
para producir múltiples trazados del cromatograma. Las múltiples salidas pueden entonces
proporcionar información adicional a partir de una única separación.
2.1.2.6 Datos de fluorescencia
Los detectores presentan sus datos en unidades de intensidad (emisión) o energía de
fluorescencia. Además, el detector PREMIER FLR también presenta la intensidad usando
unidades normalizadas para compensar la variabilidad entre detectores individuales y ajustar
cualquier disminución de la intensidad de la lámpara relacionada con el paso del tiempo. Cuando
se utilizan unidades normalizadas, los cambios en la ganancia mejoran la relación señal-ruido
pero no cambian la respuesta de los picos, lo que confiere un alto grado de reproducibilidad de
las mediciones de las señales fluorescentes entre un sistema y otro.
2.1.2.6.1 Unidades de emisión y normalización
El detector PREMIER FLR ofrece dos tipos de unidades de salida: Emisión y energía. Las
unidades de emisión se normalizan a una referencia de agua estándar y su magnitud es tan
independiente de la ganancia del fotomultiplicador (PMT) como sea posible. Se pueden
compensar los cambios que normalmente influyen en la intensidad de la señal de las mediciones
de fluorescencia, como la degradación de los componentes ópticos o de la lámpara,
renormalizando periódicamente a la referencia de agua estándar. Esta renormalización reduce
las variaciones de intensidad de las señales de fluorescencia de un detector a otro.
La siguiente ecuación sirve para calcular el valor de las unidades de emisión (EU) en cualquier
momento (t):
20 de octubre de 2020, 715006949ES Versión 00
Página 16
