de excitación y emisión pueden hacer un barrido manteniendo constante la configuración de un
monocromador y cambiando la del otro. Este tipo de funcionamiento es necesario cuando se
evalúan mezclas o se analizan estructuras químicas.
2.1.1.4 Excitación de la muestra
La banda ancha de luz de alta intensidad de la lámpara pasa a través de un filtro o
monocromador, que selecciona una banda estrecha de longitudes de onda. Esta banda estrecha
de luz después se dirige a la celda de flujo, donde excita a los analitos al pasar. Las longitudes
de onda de excitación a menudo se corresponden con la longitud de onda de absorbancia del
analito.
2.1.1.5 Celda de flujo
La celda de flujo de cuarzo minimiza la cantidad de luz difusa que puede afectar la medición y
maximiza la señal de fluorescencia. El compartimento de muestras se dispone de tal manera que
la energía de fluorescencia se captura en un ángulo perpendicular al haz (lámpara) de
excitación. Esta disposición minimiza el efecto de la difusión de Rayleigh en niveles de luz de
fondo.
2.1.1.6 Celda de cubeta
El detector PREMIER FLR con la lámpara de mercurio-xenón proporciona una mayor
sensibilidad de la que era posible utilizando los sistemas tradicionales de fluorescencia con
cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC). Sin embargo, el nuevo perfil de energía puede
requerir que el espectro de excitación de los analitos se tenga que desviar considerablemente
para que coincida con las bandas de energía de la lámpara de mercurio-xenón, lo que requiere
optimizar un método de detección de HPLC tradicional para su uso con el detector PREMIER
FLR. Para determinar los valores optimizados, se pueden hacer barridos de los intervalos de
longitud de onda de excitación y de emisión con la celda de cubeta y ver el gráfico del espectro
en ACQUITY PREMIER Console (Consola ACQUITY PREMIER) o en el software Empower
mediante la función de gráfico Spectrum λ-λ (Espectro λ-λ).
2.1.2 Medición de la fluorescencia
Para medir la fluorescencia en la celda de flujo, el detector tiene que equilibrar la necesidad de
una alta selectividad (para distinguir longitudes de onda de fluorescencia muy específicas) con la
necesidad de una alta sensibilidad (para medir intensidades bajas de fluorescencia).
2.1.2.1 Cuantificación
La fluorescencia es lineal a concentraciones bajas; sin embargo, puede dejar de serlo a altas
concentraciones.
20 de octubre de 2020, 715006949ES Versión 00
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