Tabla de contenido
Selección del protocolo que se ha de utilizar
Este tema describe los diferentes protocolos que puede seleccionar y ejecutar.
También ofrece ejemplos y cálculos de proporciones de soluciones lisantes.
Protocolos especializados
El LWA ofrece tres protocolos especializados:
•
Lyse Only (Solo lisado). Dispensa 450 µl de solución de lisado en los tubos
de muestra y realiza una mezcla. No se realizan después los pasos de
incubación ni lavado.
•
Wash Only (Solo lavado). Se lleva a cabo un paso de lavado en cada tubo de
muestras con 6400 µl de PBS o tampón de lavado. Después del paso de
lavado quedan en cada tubo aproximadamente 350 µl de suspensión
celular residual.
•
Wash/Fix (Lavado/Fijación). Realiza un paso de lavado (como se describe
en el protocolo Wash Only) y un paso de fijación, en el que se dispensan
100 µl de solución de fijación en los tubos de muestra después del lavado
(hasta llegar a un volumen aproximado de 450 µl).
Protocolo Lyse-Wash (Lisado-Lavado)
El LWA ofrece tres protocolos de lisado y lavado:
•
Lyse-Wash (Lisado-Lavado). Es un protocolo de un solo ciclo que
generalmente se utiliza para muestras de volumen inferior a 100 µl.
Se añaden 900 µl de solución de lisado una vez, se incuba durante
15 minutos y se sigue con un lavado con 6400 µl. Se añaden 100 µl de
solución de fijación a los 350 µl de suspensión celular residual para llegar a
un volumen aproximado de 450 µl.
•
Duo-Lyse (Lisado doble). Es un protocolo de dos ciclos que generalmente se
utiliza para muestras de volumen equivalente a 100 µl. Éste es el protocolo
de lisis recomendado para la BD FACS™ Lysing Solution.
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Instrucciones de uso: BD FACS
Lyse Wash Assistant
TM
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Solución de problemas
