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FRENCH
Clostridium difficile
Toxin A/B
APPLICATION
®
Le test Xpect
Toxine A/B de Clostridium difficile de Remel est un
test immunochromatographique in vitro rapide pour la détection
qualitative directe de la toxine A et/ou B du Clostridium difficile dans
les échantillons fécaux de patients chez lesquels on suspecte une
maladie liée au C. difficile .
diagnostic des maladies liées au C. difficile . Le test peut également
être utilisé pour confirmer la présence de C. difficile toxigène dans un
bouillon cervelle-cœur.
RÉSUMÉ ET EXPLICATION
L'agent Clostridium difficile a été identifié pour la première fois en
1935 mais les liens entre l'organisme et la maladie n'ont été établis
qu'en 1977. Le C. difficile est un bacille anaérobie à Gram positif
formant des spores et produisant des toxines.
clinique de l'infection au C. difficile comporte, par ordre croissant de
sévérité, les porteurs asymptomatiques, les colites associées aux
antibiotiques, les colites pseudomembraneuses et les colites
1
fulminantes.
Une baisse de la flore microbienne normale du côlon,
généralement
causée
par
surcroissance de l'agent C. difficile . Les symptômes des colites
associées aux antibiotiques se déclarent généralement entre quatre et
dix jours après le début de l'antibiothérapie.
La plupart des souches pathogènes de C. difficile produisent deux
toxines, la toxine A (entérotoxine) et la toxine B (cytotoxine), qui sont
les principaux facteurs de virulence dans l'organisme. Il semble que
l'expression de l'activité de ces toxines soit due à un enchaînement
d'évènements. La toxine A est légèrement cytopathogène mais elle
induit d'importants mouvements de fluides et une inflammation des
muqueuses. La toxine B est fortement cytopathogène mais son rôle
dans le processus de la maladie n'est pas clairement établi. On a
identifié différentes souches négatives à la toxine A et positives à la
toxine B, totalement pathogènes et capables d'entraîner l'apparition
de l'ensemble des maladies citées. La prévalence de ces variantes
diffère selon les établissements et les zones géographiques.
La maladie à C. difficile se développe en priorité chez les patients
8,9
hospitalisés.
Les patients atteints d'une maladie à C. difficile
rejettent des spores résiduelles dans les selles, spores qui peuvent
survivre jusqu'à cinq mois dans la nature. Les signes cliniques et
pathologiques des maladies à C. difficile ne sont pas faciles à
distinguer de ceux des autres maladies gastro-intestinales comme la
colite ulcéreuse, la maladie inflammatoire chronique intestinale et la
maladie de Crohn. L'infection à C. difficile toxigène peut mettre en
jeu le pronostic vital mais lorsqu'elle est correctement traitée, le taux
de mortalité des patients est faible. Par conséquent, il est important
pour les médecins de pouvoir démarrer le traitement correspondant
et de prendre des mesures appropriées pour maîtriser la
contamination nosocomiale grâce à un diagnostic rapide.
PRINCIPE
®
Le test Xpect
Toxine A/B de Clostridium difficile est un test
immunochromatographique qualitatif qui détecte les toxines A et B du
bacille C. difficile dans les échantillons de selles ou les cultures de C.
difficile toxigène. Lors du test, l'échantillon est d'abord dilué avec du
diluant d'échantillons afin de faciliter la solubilisation des toxines. Une
partie de l'échantillon dilué est alors mélangé à une dose de
conjugué 1 contenant des anticorps dirigés contre la toxine A et
contre la toxine B associé à des microp articules colorées, plus une
dose de Conjugué 2 contenant des anticorps biotinylés dirigés contre
les toxines A et B. Une dose de ce mélange est transférée dans un
dispositif de test utilisant de la streptavidine immobilisée comme ligne
de test et un anticorps de chèvre anti-immunoglobuline comme ligne
de contrôle. Les complexes immuns de toxines et d'anticorps
conjugués forment une bande visible lorsqu'ils passent sur la ligne de
test. Les conjugués de particules colorées en excès forment une
bande visible dans la ligne de contrôle indiquant que le test
fonctionne correctement.
Le test est conçu pour faciliter le
La présentation
une
antibiothérapie,
permet
2-7
CONSERVATION
Conserver les dispositifs de test dans des poches hermétiquement
fermées entre 2 et 30°C (température ambiante ou au réfrigérateur).
Conserver tous les flacons et bouteilles de réactif du kit entre 2 et
8°C. Ne pas congeler ou surchauffer. Attendre que les composants
soient à température ambiante avant de les utiliser. Avant utilisation,
mélanger doucement les bouteilles de réactif. Remettre les réactifs
non utilisés dans le réfrigérateur après utilisation.
PRÉCAUTIONS
1.
Pour utilisation diagnostique in vitro .
2.
Toutes les précautions contre les risques microbiologiques
doivent être prises et il est indispensable de bien stériliser les
prélèvements, les récipients et les dispositifs de test après
usage. Consulter la documentation appropriée lorsque cela est
10
nécessaire.
3.
Toutes les instructions doivent être lues attentivement et
scrupuleusement respectées.
4.
Les réactifs sont prêts à l'emploi et peuvent être transférés
directement depuis les flacons compte-gouttes. Ne pas diluer
les réactifs.
5.
Les réactifs provenant de kits de différents lots ne sont pas
interchangeables.
6.
Ne pas utiliser les réactifs après la date de péremption.
7.
La contamination microbienne des réactifs peut diminuer la
précision du test.
une
PRÉLÈVEMENT, CONSERVATION ET TRANSPORT DES ÉCHANTILLONS
Les échantillons doivent être placés dans des récipients propres et
hermétiques.
Les échantillons de selles frais non traités doivent être stockés
entre 2 et 8°C et être examinés dans les 72 heures. S'il est
impossible de tester les échantillons frais dans les 72 heures, ils
doivent être congelés dans un congélateur sans dégivrage à au
moins -20°C et analysés dans les 2 mois suivant le prélèvement.
Éviter les décongélation et re-congélation répétées.
Les échantillons frais dilués avec le diluant fourni dans le kit
peuvent être conservés jusqu'à 24 heures avant d'être testés
s'ils sont réfrigérés.
Les échantillons de selles recueillis dans un milieu de transport
Cary Blair modifié avec un indicateur (ou équivalent) peuvent
être réfrigérés (2 à 8°C) ou conservés à température ambiante
(20 à 25°C), et doivent être testés dans les cinq jours suivant le
prélèvement.
Les échantillons de selles qui ont été concentrés ou prélevés
dans du formol, du SAF (sodium-acétate-formol) ou du PVA
(alcool polyvinyle) ne peuvent pas être utilisés avec ce test.
RÉACTIFS ET MATÉRIELS FOURNIS
1.
Dispositifs de test (20 / 40): Chaque sachet contient un dispositif
de test à usage unique avec un dessiccatif; la membrane est
enduite de réactifs de capture
2.
Réactif conjugué 1 (3,6 ml x 1) / (3,6 ml x 2): Microparticules
bleu-noir enduites d'anticorps de souris antitoxine A et d'anticorps
de lapin antitoxine B avec 0,05% de ProClin
d'azide de sodium
3.
Réactif conjugué 2 (3,0 ml x 1) / (3,0 ml x 2): Anticorps de
chèvre biotinylés antitoxine A et anticorps de lapin antitoxine B
avec 0,03% de ProClin
4.
Diluant d'échantillon (12,0 ml x 1) / (12,0 ml x 2): Solution
tamponnée avec 0,05% de ProClin
sodium
5.
Contrôle positif (2,0 ml x 1) / (2,0ml x 2): Surnageant de culture
contenant les toxines A et B de C. difficile avec 0.05% de
®
ProClin
300
6.
Contrôle négatif (2,0 ml x 1) / (2,0 ml x 2): Solution tamponnée
avec 0,05% de ProClin
7.
Pipettes de transfert jetables (40 / 80): Les pipettes sont
graduées tous les 0,1 m
8.
Tubes
de
dilution
d'échantillons avec un volume marqué de 0,5 ml
9.
Bâtonnets applicateurs en bois (20 / 40)
10. Mode d'emploi (IFU)
9
20 / 40 Test
®
300 et <0,1%
®
300 et <0,1% d'azide de sodium
®
300 et <0,1% d'azide de
®
300 et <0,1% d'azide de sodium
(40/80):
Tubes
pour
préparation
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