Paso 3: Configuración De Los Métodos Rutinarios - Agilent Technologies 1260 Infinity Manual De Usuario

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Utilización del detector de fluorescencia
Desarrollo de métodos
Paso 3: Configuración de los métodos rutinarios
En los análisis rutinarios, las matrices de las muestras pueden influir signifi-
cativamente sobre los tiempos de retención. Para obtener resultados fiables, la
preparación de la muestra debe ser cuidadosa para evitar interferencias y los
métodos de LC deben ser lo suficientemente robustos. Con matrices comple-
jas, la detección simultánea de longitudes de onda múltiples ofrece mayor fia-
bilidad que el cambio de longitud de onda controlado mediante una tabla de
tiempos. Además, el detector de fluorescencia puede adquirir espectros de
fluorescencia mientras registra las señales del detector para el análisis cuanti-
tativo. Por tanto, en los análisis rutinarios se dispone de datos cualitativos
para la confirmación de los picos y las comprobaciones de pureza.
Detección de longitud de onda múltiple
El cambio programado de la longitud de onda se utiliza tradicionalmente para
conseguir límites de detección bajos y una elevada selectividad en análisis
cuantitativos rutinarios. Dicho cambio resulta difícil si el tiempo de elución de
los compuestos es similar y éstos requieren modificar la longitud de onda de
excitación o emisión. Los picos pueden verse distorsionados y la cuantifica-
ción puede resultar imposible si se produce un cambio de longitud de onda
durante la elución de un compuesto. Esto sucede muy a menudo en matrices
complejas e influye sobre la retención de los compuestos.
En modo espectral, el detector de fluorescencia puede adquirir hasta cuatro
señales diferentes simultáneamente. Todas ellas pueden utilizarse para el
análisis cuantitativo. Aparte de para las matrices complejas, esto resulta ven-
tajoso cuando se buscan impurezas a longitudes de onda adicionales. También
ofrece ventajas para alcanzar límites de detección bajos o aumentar la selecti-
vidad mediante el ajuste de valores óptimos de longitud de onda en cualquier
momento. El número de datos adquiridos por señal se reduce y, por tanto, los
límites de detección pueden ser más elevados, en función de los parámetros
del detector comparados con el modo de señal.
El análisis de HAP, por ejemplo, puede realizarse con detección simultánea de
longitud de onda múltiple, en lugar de con detección con cambio de longitud
de onda. Con cuatro longitudes de onda diferentes de emisión, pueden monito-
rizarse los 15 HAP (Tabla en la página 95).
Manual de usuario del detector de fluorescencia Agilent 1260 93