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Vorbereitung
Reagenzien
1.
Zur Vorbereitung und Aufbewahrung
der Reagenzienkits beachten Sie
bitte die Anweisungen in der mit den
Kits gelieferten Literatur oder in der
ausführlichen Bedienungsanleitung
(online).
2.
Lassen Sie die folgenden Produkte,
die bei niedrigen Temperaturen
aufbewahrt werden, etwa 10 Minuten auf
Raumtemperatur (20–25 °C) aufwärmen.
• IEF-Chip
• PAGE-Chip
• Rehydrierlösung
• DTT-Lösung
• Ampholyt
3.
Bereiten Sie die Rehydrier-Arbeitslösung
zur Rehydrierung des IEF-Chips und
Extraktion/Verdünnung der
Proteinprobe vor:
Volu-
Endkonzen-
Reagenzien
men
tration
Rehydrierlö-
189 µL
sung
DTT-Lösung
10 µL
50 mM
(1 M)
Ampholyt*
1–2 µL
0,5–1 % v/v
Gesamtvolu-
200 µL
men
* Wählen Sie den Ampholyten nach
dem pH-Bereich des IEF-Chips.
Für Ampholyten in 40 % w/v
Stammkonzentration, geben Sie
1 µL zu. Für Ampholyten in einer
100X-Konzentration geben Sie 2 µL zu.
4.
Bereiten Sie den Äquilibrier-Arbeitspuffer
zur Äquilibrierung fokussierter Proteine
vor der SDS-PAGE vor.
Volu-
Endkonzen-
Reagenzien
men
tration
Äquilibrier-
puffer-Vormi-
760 µL
schung
DTT-Lösung
40 µL
50 mM
(1 M)
Gesamtvolu-
800 µL
men
20424817 Rev 06/21
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Probenvorbereitung
Lösen Sie die Proteinprobe in der gemäß
Schritt 3 zubereiteten Rehydrier-Arbeitslösung.
Die Probe kann 2-fach oder stärker mit
Rehydrier-Arbeitslösung verdünnt werden,
um die gewünschte Proteinkonzentration
zu erhalten und die Salzkonzentration
zu verringern.
Eine hohe Salzkonzentration kann die
Proteintrennung während der isoelektrischen
Fokussierung beeinträchtigen und die
Stromstärke auf über 100 µA erhöhen. Proben
mit hoher Salzkonzentration sollten entsalzt
werden durch:
TCA/Acetonausfällung und Resuspendierung
der Proteine in Rehydrier-Arbeitslösung
ODER
Pufferaustausch unter Anwendung
einer Spinsäule
HINWEIS: Vermeiden Sie bei der
Protein-Resuspendierung eine Erwärmung
der Proteine über 37 °C.
Quantifizieren Sie die Proteine. Für die
2D-Elektrophorese können zwischen
0,1 und 25 µg Protein geladen werden.
Die optimale Proteinmenge hängt von der
Detektionsmethode und der Probenkomplexität
ab. Die folgenden Proteinmengen sind als
Ansatzpunkt zu verwenden. Die Anwender
müssen die Lademenge ggf. für ihre
bestimmte Probe optimieren.
• Coomassie Brillantblau-Färbung: 25 µg
• Fluoreszenzfärbung: 10 µg
• Silberfärbung: 5 µg
• Fluoreszenz-Vormarkierung: 3 µg
Das in das Gerät gegebene Probenvolumen
beträgt 10–12 µL. Die Probe kann bei Bedarf
mit Rehydrier-Arbeitslösung verdünnt werden.
26
Schalten Sie das Auto2D
Wählen Sie das Netzkabel (im Lieferumfang
enthalten), das mit den Steckdosen in
Ihrem Land kompatibel ist. Stecken Sie das
Geräteende des Kabels fest auf der Rückseite
des Auto2D
®
Geräts und das andere Ende in
die Wandsteckdose ein.
Der Netzschalter befindet sich neben dem
Wechselstromeingang auf der Rückseite des
Auto2D
Geräts. Drücken Sie den Netzschalter,
®
um das Gerät einzuschalten.
Die Anwendung wird automatisch gestartet.
Wählen Sie auf dem Bildschirm den Auto2D
Modus (Originalmodus).
Laden Sie eine Rezeptur
Wählen Sie SETTING > RECIPE [EINSTELLUNG
> REZEPTUR]. Berühren Sie den Rezeptur-
Informationsbildschirm. Das Dialogfenster zur
Auswahl einer Rezeptur wird eingeblendet.
Wählen Sie den Rezepturnamen > LOAD >
OK > EXIT [LADEN > OK > VERLASSEN].
Hinweis: Bestätigen Sie, dass der gewünschte
Rezepturname oben rechts am Bildschirm
angezeigt wird.
German
20424817 Rev 06/21
Chip-Vorbereitung
Gerät ein
®
PAGE-Chip
®
1.
Entfernen Sie das weiße Klebeband
auf der Anodenseite des Chips.
2.
Entfernen Sie vorsichtig die
Kunststoffabdeckung auf der
Kathodenseite des Chips.
3.
Spülen Sie die Anoden- und
Kathodenpufferkanäle behutsam mit
destilliertem Wasser. Wischen Sie jegliche
Flüssigkeit mit einem Papierhandtuch
vorsichtig von der Oberseite des Chips
und achten Sie dabei darauf, dass der
dünne Gelstreifen auf der Kathodenseite
des Chips nicht beschädigt wird.
Legen Sie die Chips in die
Schublade ein
Wählen Sie auf dem Touchscreen des Auto2D
Geräts OPEN > OK [ÖFFNEN > OK]. Wenn die
Schublade geöffnet ist, legen Sie den
PAGE-Chip
(hellblaue Kontur)
Anodenseite nach vorn ein. Legen Sie den
Lösungschip
(dunkelblaue Kontur)
abgeschnittenen Ecken nach vorn auf den
PAGE-Chip.
27
Kathodenseite
Anodenseite
®
mit der
mit den
German
