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RIDA qLine
autoBlot Revisión 1.0 | Manual del usuario
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12.5 Protocolo del ensayo
Esta prueba es un inmunoensayo enzimático en una membrana de nitrocelulosa (ensayo de
inmunotransferencia) para la detección cuantitativa de anticuerpos IgE específicos de alérgenos en
suero y plasma (citratados) humanos.
Ejecución de la prueba:
La ejecución de la prueba está diseñada para 36 membranas en el RIDA qLine
1
Permita que las membranas, reactivos y sueros de los pacientes lleguen a la temperatura ambiente
(20 °C a 25 °C). Agite los reactivos antes de usarlos.
2
Transfiera 5 ml de concentrado de búfer de lavado Wash 25x de 4 kits al depósito de búfer de
lavado del RIDA qLine
Todos los pasos de incubación deben realizarse a temperatura ambiente (20 °C a 25 °C).
3
Se distribuyen 400 µl de búfer de lavado sobre las membranas y
se incuban durante 1 minuto mientras se agitan.
Después de la incubación, el búfer de lavado se aspira, para lo cual las membranas se inclinan
hacia atrás.
4
Se distribuyen 400 µl de suero del paciente sobre las membranas y
se incuban durante 30 minutos mientras se agitan.
Después de la incubación, se aspira el suero, para lo cual las membranas se inclinan hacia atrás.
5
Se distribuyen 400 µl de búfer de lavado sobre las membranas y
se incuban durante 1 minuto mientras se agitan. Este paso se repite un total de 3 veces.
6
Se distribuyen 400 µl de anticuerpo a las membranas y
se incuban en el agitador orbital durante 45 minutos.
Después de la incubación, el anticuerpo se aspira, para lo cual las membranas se inclinan hacia
atrás.
7
El lavado se hace tal como se describe en el punto 5.
8
Se distribuyen 400 µl de conjugado a las membranas y
se incuban en el agitador orbital durante 20 minutos.
9
El lavado se hace tal como se describe en el punto 5.
Pero el paso de lavado se repite hasta 7 veces.
10
Se distribuyen 400 µl de substrato a cada membrana y
se incuban en el agitador orbital durante 15 minutos.
Después de la incubación, el substrato se aspira, para lo cual las membranas se inclinan hacia
atrás.
11
Se distribuyen 400 µl de búfer de lavado a las membranas y
se incuban en el agitador orbital durante 1 minuto.
Después, el búfer de lavado se aspira, para lo cual las membranas se inclinan hacia atrás.
12
Se distribuyen 400 µl de agua destilada a las membranas y
se incuban en el agitador orbital durante 1 minuto.
Después, el agua se aspira, para lo cual las membranas se inclinan hacia atrás.
13
Las membranas se secan mediante un ventilador integral durante 10 minutos.
14
Como último paso, el escáner integral toma una fotografía de todas las membranas y la envía al
RIDA qLine
Soft para su evaluación.
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Los resultados se expresan en UI/ml y en 7 clases RAST.
autoBlot y llene hasta 500 ml con agua destilada (= búfer de lavado).
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autoBlot.
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