Tabla de contenido
Sample tracking B Kit, REF. IMG-311) a cada muestra de ADN. Añadir la cantidad de ADN
diluido a 10 ng/µL recomendada en el paso anterior (Sección 6.14) junto con el reactivo
de seguimiento correspondiente a cada uno de los mixes.
5. Agitar en vortex, centrifugar y pipetear 22.5 µL en cada pocillo de la placa de PCR.
6. Añadir con una pipeta multicanal 2.5 µL de los cebadores de la placa PCR-Pancreatitis
(placa roja) a cada uno de los pocillos.
7. Sellar la placa de PCR y centrifugar con un spin.
8. Colocar la placa de PCR en el termociclador y ejecutar el siguiente programa de
amplificación con el apropiado rato de las rampas (4ºC/s):
Temperatura
95ºC
94ºC
57ºC
72ºC
72ºC
4ºC
Tabla 2. Programa de PCR óptimo para T3000 Thermocycler, T1 Thermocycler, GeneAmp® PCR
System 2720, GeneAmp® PCR System 9700 y SimpliAmp Thermal Cycler.
Es posible detener el protocolo en este punto.
Los productos de PCR pueden almacenarse a 4ºC si se va a continuar con el protocolo en
las próximas 24 horas o a -20ºC para periodos de tiempo superiores.
Posteriormente se recomienda analizar, mediante electroforesis en gel de agarosa al 2%, los
productos de PCR para verificar el correcto funcionamiento del ensayo. Si el proceso de
amplificación ha funcionado correctamente se esperaría:
▪
Amplificación en todas las PCRs que contienen muestra de ADN. El resultado esperado
se observaría como un smear entre 200 bp y 800 bp.
▪
Ausencia de amplificados en el control negativo de PCR
Rev. 4. 07/02/2019
Tiempo
15 minutos
30 segundos
90 segundos
90 segundos
10 minutos
Ciclos
1
38
1
1
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